实验一细胞形态多样性及细胞计数.ppt

1、细胞形态观察 （l）将细胞培养瓶从37℃二氧化碳培养箱(或温箱)中取出，注意观察细胞培养液的颜色和清澈度，然后，将细胞培养瓶平稳地放在倒置显微镜载物台上，此时应注意不要将瓶翻转，也不要让瓶内的液体接触瓶塞或流出瓶口。 （2）打开倒置镜光源，通过双筒目镜将视野调到合适的亮度。 （3）调节粗调旋钮调整物镜的高度进行对焦，在看到细胞层之后，再用细调节器将物像调清楚，注意观察细胞的轮廓、形状和内部结构，在观察时，最经常使用的是10X物镜。 * 【实验目的】 了解培养中的动物细胞的一般形态和生长状态；掌握细 胞计数的基本方法。 实验一 细胞的形态观察和细胞计数 【实验原理】 1、细胞形态观察 根据体外培养细胞在培养时，是否能贴附于支持物上生长，可将其分为贴附型生长细胞和悬浮型生长细胞两大类。贴附型细胞在培养时能贴附在支技物表面生长，一般有两种形状，即表现为成纤维型细胞和上皮细胞生长。悬浮型细胞在培养中悬浮生长。 大多数细胞是贴附型生长的。当细胞贴附在支持物上后，细胞的形态失去它们在体内时的原有特征，在形态上表现单一化的现象。 　　此细胞形态与体内成纤维细胞的相似而得名，胞体呈梭形或不规则三角形，中央有卵圆形核，胞质向外伸出２～３个长短不齐的突起。细胞在生长时呈放射状火焰状或旋涡状走行，除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织细胞常呈此形态。 成纤维细胞型 上皮细胞型　　 本型细胞呈扁平不规则多角形，中有圆形核。细胞彼此紧密相连成单层膜，生长时呈膜状移动；处于上皮膜边缘的细胞总与膜相连，很少脱离细胞群单独活动；起源于内、外胚层细胞如皮肤表层、消化层上皮、肝、胰、肺泡上皮等皆呈上皮型形态。 　　此型细胞在支持物上散在生长，一般不连接成片，细胞质经常伸出伪足或突起，呈活跃的游走或变形运动。此型细胞不很稳定，有时亦难和其它型细胞相区别，在一定条件下，如培养基化学性质变动等，它们也可能呈成纤维细胞形态。 游走细胞型 　　有一些组织和细胞，如神经组织的细胞等，难以确定他们规律和稳定的形态，可通归入多形细胞型。 多形细胞型 悬浮型 有的细胞在培养时不粘附于支持物上,而是呈悬浮生长状态,如某些癌细胞和血液白细胞。　　细胞悬浮生长时胞体为圆形。细胞悬浮培养的优点是细胞生存空间大,生长时间长,能繁殖出大量细胞。　　培养细胞形态的分类,主要是根据细胞在培养中的表现以及描述上的方便而定。它可受很多因素的影响而发生变化。当细胞处于较好的培养条件时,形态上有相对的一致性,在一定的程度上能反映细胞的起源以及正常和异常的区别。但培养条件是很难控制的，难免不发生变化。如CO2浓度，培养液的PH,支原体的产生,包括细胞接种密度等,都会影响细胞形态。悬浮型和贴附型的性质也不是一成不变的。在一定条件下,悬浮型细胞可呈贴附状生长。由于培养细胞形态的易变性,在利用形态学指标判定细胞类型和其它一些变化时,应参考多方面指标,必要时应利用电镜来提供形态学依据。 sp2/0 1.细胞种类：小鼠骨髓瘤细胞 2.培养的天数：复苏后12小时； 3.放大倍速：倒置显微镜 X20； 4.培养基种类：DMEM+6%FBS； 5.细胞状态与特征简述:细胞呈圆型或椭圆形。 培养细胞形态分析 贴壁细胞在生长状态良好时，胞体细长、胞浆清亮，细胞内颗粒少，看不到有空泡，细胞边缘清楚，细胞长成单层时呈漩涡状排列；悬浮细胞当表现出边缘清楚，透明发亮时，生长较好；反之，则较差或已死亡。 在细胞机能状态不良时，细胞轮廓会增强，反差增大；细胞内颗粒较多，透明差，空泡多。 若细胞胞体肥大、胞浆内混浊、颗粒增多、折光性下降、变扁平透明，细胞核明显增大、细胞排列极不规则则，细胞可能已经衰老。 培养基内有pH指示剂的存在，因此它的颜色往往可以间接地表明细胞的生长状态。呈橙黄色时，细胞一般生长状态较好；呈淡黄色时，则可能是培养时问过长，营养不足，死亡细胞过多；如呈紫红色，则可能是细胞生长状态不好，或已死亡。当细胞生长状态良好时，培养液应清澈透明，悬浮的细胞和碎片很少。当瓶内培养基混浊时，应想到细菌真菌污染的可能。 实际上，一种细胞在培养中的形态并不是永恒不变的，它随营养、pH、生长周期而改变，但在比较稳定的条件下形态基本是一致的。在贴壁细胞培养中，镜下折光率高，圆而发亮的一般被认为是分裂期细胞。肿瘤细胞有重叠生长的特征。 【实验内容】 细胞形态多样性及细胞计数 一. 实验原理 当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中的细胞数目。 1.血球计数板的