细胞常见染情况分析.docxVIP

细胞培养常见污染的判别及应对措施 2011-01-02 10:19:04| 分类： HYPERLINK /sin_007@126/blog/ \l m=0t=1c=fks_084066092083085068084080084095082095082071081095087070 \o 实验 实验 | 标签： HYPERLINK /sin_007@126/blog/ \l m=0t=3c=污染 污染 HYPERLINK /sin_007@126/blog/ \l m=0t=3c=无菌 无菌 HYPERLINK /sin_007@126/blog/ \l m=0t=3c=细胞 细胞 HYPERLINK /sin_007@126/blog/ \l m=0t=3c=培养基 培养基 HYPERLINK /sin_007@126/blog/ \l m=0t=3c=灭菌 灭菌 |字号大中小 订阅 一、避免细胞培养污染的措施： 污染是细胞培养中一个大敌，一旦污染，前功尽弃！决定要进行细胞培养，首先一定要有强烈的无菌意识！操作中要遵守严格的操作规程，不要怕麻烦，越细心越好！注意以下几点，大部份的污染是可以避免 的： 1. 每次开始实验前，先用紫外照无菌台和实验室20分，用酒精擦手，台面和不消毒的器械（如移液枪等）；实验中，如允许，尽量多过火，开起或盖盖都靠近火焰或在无菌台深处；使用无菌台后，再用酒精擦台面，紫外照20分！ 2. 滴管不要接触瓶口，吸取废液及加入新鲜培养基时都要注意不要滴在瓶口上等等。 3. 凡是接触瓶口后都要用酒精灯烧烧。 4. 提取组织时，往往头会距离组织很近，所以带口罩很重要！还要换无菌衣（紫外照过的白大褂）。 5. 注意配制完全培养基时不要发生污染，在使用前一定要做无菌培养，因为一般应用污染后的培养基培养细胞后，很快就会发生特别严重的污染。 6. 操作时一定按照实验室的要求，切忌粗心大意。 7. 使用完的东西尽快移出无菌台！另外无菌台上的器械，试剂摆放，也尽量遵循一定的顺序！依污染可能程度依次向外摆。 二、常见的细胞培养污染： 下面是几种细胞培养过程中常见的污染： 1. 支原体污染： 传说中的黑焦虫，长得暴快。24小时就满视野都是了。污染源大多数情况下是培养用血清。 图1 支原体污染的光镜检测（圆圈所示，×10倍） 图2 支原体污染的光镜检测（×20倍） 图3 支原体污染的荧光检测 图4 支原体污染的电镜检测（×30k，煎蛋状和其他形状） 图5 支原体污染的电镜检测 2. 念珠菌污染： 似乎无处不在，而且顽固得很。长得暴快（12h就能在细胞上面密布）。培养液澄清。低倍显微镜下像黑色的沙子铺在细胞上，高倍镜下呈树枝状或葡萄状。 图6 念珠菌污染的光镜检测（低倍镜） 图7 念珠菌污染的光镜检测（高倍镜） 图8 念珠菌污染的光镜检测（高倍镜） 图9 念珠菌污染的检测（革兰氏染色阳性） 这么大面积的污染，你可以看看是不是操作上出了问题，要不然就是培养基的问题。既然已经污染了，就全部更换你的器皿。培养箱的水没有必要用无菌水，但最起码要是蒸馏水。 3.霉菌污染 比较常见的一种污染，常常来源于污染的空气、水和器械。 图10 霉菌污染的光镜检测（低倍） 图11 霉菌污染的光镜检测 （典型的霉菌污染，肉眼看到白色的团块或白点，镜下呈丝状。400倍） 图12 霉菌污染的光镜检测（树枝状，高倍） 图13 霉菌污染的倒置显微镜检测（树枝状） 4. 杆菌污染： 培养基中加入抗生素可以减少此种污染，但也不是绝对的。 图14 杆菌污染的光镜检测（瑞氏染色，高倍） 图15 杆菌污染的光镜检测（瑞氏染色，低倍） 细胞中的颗粒到底是怎么回事？我的细胞总有颗粒，开始是细胞中有，后来细胞之间也好像有许多颗粒。好像是细胞碎片一样。是什么东西啊？是支原体污染吗？这可是我刚买回来的细胞啊! 我们实验室也有这种情况，是不是黑的小碎片，有人说是细胞代谢产物，后来拿到高倍镜下看还会动，就怀疑是污染了，也想问问大家到底是什么 是黑色的小碎片。我没注意到它会动，只是觉得不像是活的微生物。我觉得是由于某种污染或外界因素导致的细胞状态变差，裂解出的东西。但是，是什么东西不清楚。 的确很常见在以前帖子见到说是“黑焦虫”。长时间培养的很容易出现，我根据自己的经验估计是一种污染，因为随着黑点增多，本来生长旺盛的细胞逐渐停滞甚至死亡。而且我后来原代培养的几批细胞并没有发现，我怀疑有好多细胞系本身就是污染的。不过增加换液次数的情况下，好象一般不太娇气的细胞生长不是很受影响。 以前听很有经验的老师说黑焦虫是国产血清的问题，可以有条件换进口血清试试，或者离心一下也可能能解决问题。那么所谓的“黑焦虫”到底是什么东西啊？有谁知道？ 我培养的细胞也出现过此中问题，放到高倍镜下看时有