血球计数板专题复习.ppt

计数室两种规格 1．16×25型的计数板 将计数室放大，可见它含16中格，一般取四角：1、4、13、16四个中方格（100个小方格）计数 。细胞个数／1mL＝100个小方格细胞总数/ 100  ×400×10000×稀释倍数 2．25×16型的计数板 中央大方格以双线等分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格，供细胞计数用（见图三）。一般计数四个角和中央的五个中方格（80个小方格）的细胞数。 细胞个数／1mL＝80个小方格细胞总数/ 80 ×400×10000×稀释倍数 注意事项 1.从试管中吸出培养液进行计数之前，建议将试管震荡几次，目的是什么？ * * 血细胞计数板 显微镜直接计算法 血球计数板的构造和使用 方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物计数用。 大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm， 即1mm×1mm×0.1mm，其容积为0.1mm3； 血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物数量的仪器，由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。 血球计数板的结构 大方格 中方格 小方格 计数 16×25型： 一般取四角的四个中方格（100个小方格）计数 25×16型： 一般计数四个角和中央的五个中方格（80个小方格）的细胞数。 血球计数板的使用方法步骤 1．镜检计数室。在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数； 2．加样品。将清洁干燥的血球计数板的计数室上加盖专用的盖玻片，用吸管吸取稀释后的酵母菌悬液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行缓缓渗入，一次性充满计数室，防止产生气泡，多余培养液可用滤纸吸去； 3．计数。稍待片刻（约5min），待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部后，将计数板放在载物台的中央，先在低倍镜下找到计数室所在位置后，再转换高倍镜观察、计数并记录。 目的：使培养液中酵母菌分布均匀，以保证 估算准确，减少误差 2 ．如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当对培养液进行稀释。具体方法是： 摇匀试管，取1mL酵母菌培养液，加入成倍的无菌水稀释，稀释n倍后，再用血球计数板计数，所得数值乘以稀释倍数。以每小方格内含有4—5个酵母细胞为宜。 3．活酵母有芽殖现象，若芽体达到母细胞大小的一半时，即可作为两个菌体计数，若芽体小于母细胞一半时为1个酵母细胞。 4．对于压在方格界线上的酵母菌应当计数同侧相邻两边上的菌体数，一般可采取“数上线不数下线，数左线不数右线”的原则处理，另两边不计数。 5．计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算，对每个样品可计数三次，再取其平均值。 6．血球计数板的清洁 血球计数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用95%的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。 *