GB/T 18090-2000猪繁殖和呼吸综合症诊断方法.pdf

GB/r18090-2000 前 言 猪繁殖和呼吸综合症(简称PRRS)是由PRRS病毒引起的一种接触传染性疾病。各种年龄的猪均 易感染。妊娠母猪感染后可引起流产、死胎、木乃伊胎及弱胎，仔猪可发生呼吸障碍和高病死率，其他猪 常呈隐性感染或仅出现轻度的呼吸道症状。PRRS病毒有欧洲型和美洲型两种主要抗原型，分别以IN 和VR-2332为代表株，型间具有明显的抗原交叉反应性。据现有资料，我国流行的毒株为美洲型 本病 几乎发生于世界各养猪国家，并于九十年代中期传入我国。由于其对养猪业的严重威胁性，国际兽疫局 (1996)已将本病列为B类传染病。 大连动植物检疫局在国内率先开展了PRRS的研究工作，建立了具有与国际同等水平的病毒分离 鉴定、间接免疫荧光试验和血清中和试验等诊断方法。其他单位也相继建立了多种酶联免疫吸附试验 等 本标准是在综合我国科研成果的基础上，参照国际兽疫局(OIE)编写的 《哺乳动物、禽和蜜蜂A和 B类疾病诊断试验和疫苗标准手册》(第三版，1996)编写的。其技术内容与OIE所推荐的基本一致。 本标准的附录A、附录B和附录C都是标准的附录。 本标准由农业部提出。 本标准起草单位:中华人民共和国大连动植物检疫局。 本标准起草人:孙颖杰、苏永生、潘凤城、孙延峰、简中友。 中华人民共和 国国家标准 猪繁殖和呼吸综合症诊断方法 GB/T18090-2000 Diagnosticmethodsofporcinereproductive andrespiratorysyndrome 1 范围 本标准规定了猪繁殖和呼吸综合症((PRRS)的诊断方法。 本标准适用于猪繁殖和呼吸综合症的诊断。 2 诊断方法的种类和选用 PRRS的诊断方法有多种。依据临床症状和病理变化只可作出初步诊断，确诊必须依靠实验室检 查。目前已建立和应用的实验室诊断技术有病毒的分离与鉴定、免疫过氧化物酶单层试验UPMA)、间 接免疫荧光试验(IFA)、间接酶联免疫吸附试验(间接ELISA)和血清中和试验(SN)等。病毒的分离与 鉴定多用于急性病例的确诊和新疫区的确定。其余4种方法主要用于检测PRRS病毒抗体 IPMA,IFA 和间接ELISA三者特异性相似，但以间接ELISA的敏感性最高。应用这三种方法一般不易区别病毒的 抗原类型，故多适用于确定病性。SN反应具有明显的抗原型别差异，因此，它既适用于确定病性，也适 用于鉴定病毒的抗原类型。中和抗体出现最晚，不适合于早期诊断 本标准指定上述五种实验室诊断技术为我国进出境和国内生猪PRRS的诊断方法，保证了我国对 PRRS的诊断与国外的一致性。在实际应用时，可根据需要和条件，从中选用1.2种方法即可。 3病毒的分离与鉴定 3门 材料准备 3.1.1 器材:96孔细胞培养板、微量移液器、恒温水浴箱、二氧化碳(COQ)恒温箱、普通冰箱及低温冰 箱、离心机及离心管、组织研磨器、孔径。.2hem的微孔滤膜、普通光学显微镜。 3.1.2 试剂:RPM11640营养液、犊牛血清、青霉素(10IU/ml)与链霉素(100pg/mL)溶液,7.5%碳 酸氢钠溶液等。 3.1.3 细胞培养物:猪原代肺泡巨噬细胞培养物((PAM)或MARC-145或HS2H细胞。PAM 由无 PRRS猪获取，并经批次检验合格，制备和检验方法见附录B.MARC-145或HS2H细胞由国家指定单 位提供 3门.4 样品 3.1.4.1样品的采取和送检:在发病早期，无菌地采取病猪的血清或腹水对病死猪(如流产的死胎)和 扑杀猪(如弱胎猪)，应立即采取肺、扁桃体和脾等组织数小块，置冰瓶内立即送检。不能立即检查者，应 放一25C一一30C冰箱中，或加50%甘油生理盐水,4℃保存送检 3.1.4.2 样品的处理:血清和腹水可直接使用。肺、脾和扁桃体等组织可单独使用，也可混合后使用。各 组织剪碎后研磨成糊状，加入RPM11640营养液，制成10%悬液，3000Xg离心15min，吸取上清液，加 入青霉素500IU/ml、链霉素500vg/ml、庆大霉素500pg/ml和两性霉素B200pg/m1。怀疑有细菌 国家质t技术监督局2000一04一26批准