GB/T 18636-2002蓝舌病诊断技术.pdf

(;B/,r18636 2002 前 卜J 本标准根据我国近二十年对蓝舌病诊断的研究成果和技术的发展，参考世界动物P.}几组织厂w。山! OrganizationforAnimallieaIth(#}),OfficeIntentionaldesEpizootic(法).)(工G」标准性文件世《界动物 I1.生组织推荐的诊断力一法和生物制品标准手册))2.1.9条 “蓝占病”和澳大利亚动物疫病标雕诊断方法 Bluetongue 帝而编写的 本〔标准引用了GI3/T18089-200A(微量中和试验及病毒分离和鉴定方法》 有关规定力法 俄舌病是由库蝶传播、蓝舌病病毒引起的仗害反当动物的严重传染病。蓝舌病病毒系呼肠孤病毒科 环状病毒属t3群成员、国际已知有24个血清型，在血清学 卜与环状病毒属相关病毒有交叉反应:该病 毒主要引起绵羊发病和死亡 牛及其他反=1动物常为隐性感染，但川通过媒介昆虫传播本病 鉴于该病 的诊断和检疫技术复杂，因此应建立该病的综合诊断技术标准.这是制定本标准的宗旨 本标准规定的方法，分别适用于病At分离鉴定、病原检测、病毒血清j}1鉴定和抗体检测等不同需要。 木标准的附录A、附录日都是标准的附录，附录C是提示的附录。 本标准山中华人民共和国农业部提出。 本标滩山个国动物检疫标准化技术委员会归CI, 本标准起草单位:云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室、农业部动物检疫所、大津动植物检疫 )1.) 本标准主要起草人:张念祖、杨承谕、李志华、张富强、胡玉玲、张开礼、马洪超、赵祥平、向文彬 中华人 民共和 国国家标 准 蓝 舌 病 诊 断 技 术 GB/,r18636-2002 Diagnostictechniquesforbluetongue 1 范围 本标准规定J蓝舌病的诊断技术和程序。 本标雕适用于蓝舌病的诊断和检疫。4,5,6章用于病毒分离鉴定和病原检测,7,8章用于病毒的血 清型鉴定，9,10章用于抗体检测。 2 引用标准 下列标准所包括的条文.通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均 为有效。所有标准都会被修订.使用本标准的各方应探讨使用下列标准必威体育精装版版本的可能性。 (B/f18089 2000 蓝舌病微W血清中和试验及病毒分离和鉴定方法 3 病毒分离和鉴定 3.1 器械和设备 3.1.1 %孔组织培养板(平底，简称96孔板)，单道微量加样器(0.511一101L,51,1,-10,11· 4011一，0p1.200tal一100011)及滴头，八道连续加样器(50fl,,100V1_,150uL,20011)及滴头 3门.2 1(、2oC、一80(冰箱，普通恒温培养箱及二氧化碳培养箱。 3门.3 鸡胚开孔器，照蛋箱或鸡胚用灯，组织捣碎器及擦镜纸(高压灭菌备用)。 3.1.4 超声波粉碎器，低速离心机，倒置显微镜及荧光显微镜 I2 试剂 J卜材料 12门 肝素抗凝血采血竹 3.2.2 细胞:蚊子细胞(C6/36)、仓鼠肾细胞(BHK,)或非洲绿猴肾细胞(Vero) 3.2.3 细胞培养液及分散液(按常规配力配制) 3.2.4 ir,病p-s隆抗体1(8n3B6,7D3n2)o 12.5 蓝r-病荧光抗体 12.6 1()一11l1龄鸡胚。 13 病毒分离 I11 样品的采集和制备见(:B/118089-2000中8.1。 I12 鸡胚接种见(.B门’18089-2000中8.2 I13 接种细胞 33.3.1将捣碎的鸡胚肝组织离心，2000r/min,10min，取r.清液 为避免不必要的“有传”先‘对待分 离材料进行捕获酶联免疫吸附(ELISA)试验(见第 ‘章)，将呈阳性的反应材料接种 (;6/36细胞，睡份 样.结接两管(瓶)，梅管(瓶)接 。.2ml。将接种细胞置于30C温箱培养7d 13.3.2 吹打接种的(6/36细胞，接种于BHK 细胞，侮份C6/36接种八管(瓶)BHK ，旬管0.2ml， 接种的BIIK细胞ti:于37(环境中，吸附th一hRAI生)竺兰全1夔鲤选竺2缨燮些堕生 出现细 中华人民共和国国家质里监督检验检疫总局2002-02-19批准 2002-0501实施