生化分离技术核心知识点.docVIP

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第一章 生物技术下游加工过程特点:1.发酵液或培养液是产物浓度很低的水溶液 2.培养液是多组分的混合物 3.生物产品的稳定性差 4.对最终产品的质量要求很高 生物技术下游加工的一般步骤:1.发酵液的预处理与固-液分离 2.初步纯化 3.高度纯化 4.成品加工 生物技术产品的类型:1.按分子质量:小分子质量、大分子质量 2.按产品所处位置:细胞内、细胞外 第二章 共价过程中导致的失活:1.集团本身的共价修饰,导致基团功能不起作用 2.蛋白质上任何基因的共价修饰,使三维结构受到破坏 对策:1.避免细菌污染 2.水分的除去 3.高浓度的化学物质会使蛋白质变性,应避免 4.高浓度的底物、多元醇和稳定盐利于稳定蛋白质 5.对许多蛋白质而言,为防止硫羟基的氧化和降低光氧化的危险,除去空气至关重要 第三章 悬浮液预处理方法:1.加热法 2.调节悬浮液pH值 3.絮凝和凝聚 4.使用惰性助滤剂 去除悬浮颗粒,依据物理、化学性质:颗粒密度、颗粒大小、颗粒表面性质 过滤方法:恒压过滤、恒速过滤、变速变压过滤 过滤器类型:1.真空过滤器:转鼓真空过滤器、圆盘真空过滤器、水平带式真空过滤器 2.压滤器:板框压滤器、加压叶滤器、带式压滤器、气压罐式连续压滤器 带式压滤器的工作必要条件:料液过滤前都要加絮凝剂进行预处理,使悬浮液成絮团 错流过滤:如果料液给过滤介质表面一个平行的大流量的冲刷,则过滤介质表面积累的滤饼会减少到可以忽略的程度,则通过过滤介质的流速则减少。 第四章 细胞壁经酸水解,可以获得:肽聚糖、氨基酸、磷壁酸、糖、脂质 破碎率的评价:1.直接计数法 2.间接计数法 细胞的破碎按是否外加作用分为:机械法(高压匀浆法、珠磨、超声波法)、非机械法 超声波法理论依据:超声波破碎细胞的机理可能与超声波引起的空穴现象有关 非机械法:1.酶法融胞 2.化学法:a.酸碱调节溶液pH值 b.有机溶剂常用甲苯 c.表面活性剂是两性化合物 3.物理法:a.渗透压冲击法 b.冻融法 c.干燥法 4.其他方法:a.多种破碎方法相结合 b.与下游过程相结合 c.与上游过程相结合 第五章 离心分离可分为:1.离线沉降 2.离心过滤 3.离心分离+超离心 离心分离因数Fr:粒子在离心机中产生的离心加速度与自有下降的加速度之比 离心设备的放大:1.等价时间Gt法 2.Σ因子法 超离心技术分类:1.制备性超离心:粒子差速离心、一般密度梯度离心法、等密度离心法 2.分析性超离心:相对分子质量测定、大分子纯度估计、检测大分子中构的变化 3.超离心设备:分析用超离心机、制备用超离心机 第六章 膜分离分类:1.以静压力差为推动力的膜分离过程:微滤、超滤、纳滤、反渗透 2.以蒸汽分压为推动力的膜分离过程:膜蒸馏、渗透蒸发 3.以浓度差为推动力的膜分离过程:渗析 4.以电位差为推动力的膜分离过程:电渗析 膜的类型:1.有、无孔膜 2.膜对称性(各向同性膜、不对称膜、各向异性膜) 3.膜的孔道特性 4.膜材料 水通量:膜对纯水的通过量,是用在压力为0.1MPa,温度为20℃的条件下,透过一定量纯水所需的时间来测定。 截留分子质量MWCO:相当于一定截留率(90%/95%)的相对分子质量。 膜组件:平板式、管式、螺旋卷式、中空纤维式 浓差极化:在超滤过程中,由于水透过膜,因而在膜表面的溶质浓度

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