生物竞赛南京大学夏令营分子生物学.pptVIP

基因突变 DNA分子很“脆弱” 大多数DNA损伤可以被修复 其它生物大分子损伤后则被降解 原因： 细胞内DNA分子的拷贝数少 DNA的结构决定其容易被修复 例题 如果基因中4种脱氧核苷酸的排列顺序发生改变，这一突变一定导致： A.遗传性状改变 B.遗传密码改变 C.遗传信息改变 D.遗传规律改变 2007江苏高考题 基因突变是生物变异的根本来源。下列关于基因突变特点的说法正确的是： A.无论是低等还是高等生物都可能发生突变 B.生物在个体发育的特定时期才可发生突变 C.突变只能定向形成新的等位基因 D.突变对生物的生存往往是有利的 基因重组 DNA重组技术 基因工程 目的基因获取 从基因文库中获取 通过化学方法人工合成 利用PCR技术体外扩增 重组体制备 选择载体 条件：自主复制、多克隆位点、筛选标记 限制性内切酶酶切 DNA连接酶连接 重组体的转化 植物细胞：农杆菌转化、基因枪法、花粉管通道法 动物细胞：显微注射法、脂质体法、腺病毒法 微生物细胞：CaCl法、电转化 克隆鉴定 抗性筛选 PCR扩增筛选 酶切筛选 2007全国高考题 下列有关基因工程中限制性内切酶的描述，错误的是： A. 一种限制性内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列 B.限制性内切酶的活性受温度影响 C.限制性内切酶能识别和切割RNA D.限制性内切酶可从原核生物中提取 例题（多选） 人们利用基因工程的方法，用大肠杆菌生产人的胰岛素，这一过程涉及： A. 用适当的酶对胰岛素基因和运载体进行切割并连接 B.把重组后的DNA分子导入受体细菌内进行扩增 C.检测重组DNA分子是否导入受体细菌内并表达出性状 D.筛选出能产生胰岛素的工程菌 首先由H.O. Smith和K.W. Wilcox在1970年从流感嗜血菌中分离。分离的第一个酶是Hind Ⅱ （1）识别位点序列 未甲基化修饰的双链DNA上的特殊靶序列（多数是回文序列）。 与DNA的来源无关。 （2）切割位点切开双链DNA，形成粘性末端或平齐末端。 （3）粘性末端（sticky ends，cohensive ends） II型限制性内切酶 连接 逆转录 mRNA cDNA 限制性酶切 dsDNA 粘性末端 PCR 克隆载体 线性载体 限制性酶切 转化 大肠杆菌 含有抗生素的平板 PCR筛选阳性重组子 培养扩增目的质粒 因转入载体DNA而具有抗性 C ABCD * 内在因素： DNA结构本身的不稳定； DNA复制中的碱基错配； 氧自由基； 环境因素： 化学因素---各种化学诱变剂，如黄曲霉 素、烷基化试剂等 物理因素---紫外辐射和离子辐射（X射线 和γ射线） 碱基损伤： 碱基丢失 碱基转换 碱基修饰 碱基交联 碱基错配 损伤类型： DNA链的损伤： 链的断裂 DNA链的交联 DNA与蛋白质之间的交联 一些烷基化试剂 EMS (Ethyl methane sulfanate) 甲基磺酸乙酯 CH3—S—O--CH2CH3 O O MMS 对甲基甲磺酸 CH3—S—O--CH3 O O SM (Sulfur Mustards gas 硫芥子气) HS CH2CH2Cl CH2CH2Cl 发生在DNA上的可遗传的永久性结构变化统称为突变。 大多数DNA损伤可以被各种修复机制修复，不能修复或者修复出错就导致突变。 点突变 ( point mutation) 移码突变 ( frameshift mutation) 突变的类型： 突变是否一定产生表型变化？ 中性突变 突变是否能遗传给后代？ 单细胞生物 多细胞生物 点突变： 碱基对置换 点突变的结果： 同义突变 错义突变 无义突变 移码突变： 显性突变 ( dominant) 隐性突变 ( recessive) 突变发生机理： 自发突变 ( spontaneous mutation) 诱发突变 ( induced mutation) 诱发突变： 碱基类似物 烷基化试剂 脱氨基试剂 羟胺 DNA嵌入试剂 B A 限制性核酸内切酶 限制