tan第二章基因工程的工具酶课件.ppt

本课程内容;第二章 基因工程的工具酶;2.1 核酸酶? 限制性核酸内切酶;;限制性内切酶（Endonucleosase）的发现 ;;;;2.1.2 限制性核酸内切酶的命名法;;2.1.3 限制性内切酶的识别序列;; recognition sequence enzymes 5＇ GTT AAC 3＇ HpaⅠ blunt end 3＇ CAA↓TTG 5＇ 5＇ G↓AATTC 3＇ EcoRⅠ 5’protruding end 3＇ CTTAA↑G 5＇ 5＇ A↓AGCTT 3＇ Hind Ⅲ 5’protruding end 3＇ TTCGA↑A 5＇ 5＇ G↓GATCC 3＇ BamHⅠ 5’protruding end 3＇ CCTAG↑G 5＇ 5＇ CTGCA↓G 3＇ PstⅠ 3’protruding end 3＇ G↑ACGTC 5＇ ;识别序列在DNA上出现的概率;;;2.1.4 限制性内切酶的切割位点;;2.1.5 限制性内切酶的切割方式;粘性末端 和平末端;同尾酶（isocaudamer）;2.1.6 限制性核酸内切酶的反应体系;2.1.6.1 底物DNA;2.1.6.2 酶量;2.1.6.3 反应缓冲液;2.1.6.4 反应温度和时间;2.1.7 限制性核酸内切酶的星活性;;2.1.8 限制性核酸内切酶对DNA的消化作用;2.1.9 酶切注意事项;2.2 甲基化酶 ;;2.3 DNA连接酶 (DNA ligase);2.3.1 DNA连接酶（DNA ligase）;E. coli DNA ligase和T4 DNA连接酶;;2.3.2.1 具黏性末端的DNA片段之间的连接;2.3.2.2 具平末端DNA片段之间的连接;affecting factors;2.3.2.3 DNA片段末端修饰后进行连接;2.3.2.4 DNA片段加连杆（linker）后的连接;2.4 聚合酶;2.4.1 DNA聚合酶 (DNA polymerase);2.4.2 反转录酶 (reverse transcriptase);2.4.3 RNA 聚合酶 (RNA polymerase);2.5 修饰酶;T4多核苷酸激酶(bacteriophage T4 polynucleotide kinase)：;碱性磷酸酯酶(alkaline phosphatase):;nuclease 以核酸为底物的水解酶 按底物专一性分：RNase、DNase、非专一性核酸酶 按作用位点分：内切或外切酶 5‘-核酸酶或3’-核酸酶 常用:BAL31核酸酶、S1核酸酶、绿豆核酸酶、RNaseA RNaseT1、DNaseⅠ、外切核酸酶Ⅲ、λ噬菌体 外切核酸酶等。 许多核酸酶兼有内切和外切活性 ; 核酸酶的分类 内切酶 ──非专一性── 外切酶 ─3＇-核酸酶 核酸酶─ 内切酶─ ─5＇-核酸酶 ──RNA─ 外切酶 ─专一性─ 非限制性 ── 内切酶─ 限制性 ──DNA─ ──外切酶 ;复习思考题