方法学操作规范SOP.doc

方法学SOP操作规范 英文文章对方法学的要求 标准曲线（Standard curve） 目的：为消除和校正在测定不同浓度的样品时间产生的误差。 方法：配置一份对照品溶液（单一或者混合对照品），进样分析时取不同的进样体积建立标准曲线。取最低浓度稀释数倍，当所测指标S/N=10时即为定量限（LOD）；当所测指标S/N=3时即为检测限（LOQ）。 结论：建立标准曲线时，至少取5个点建立标准曲线且使得样品浓度在标准曲线范围内，得到相应的线性方程，计算出相关系数R，用R来衡量拟合程度，一般要求R需大于0.999才算合格。检测限表示检测被测物质所需要的最低浓度或者量，定量限表示准确测定被测物质含量所需要的最低浓度或者量。 注意事项：药材多指标定量时，一般用的是混合对照品。标准曲线至少需要5个点才能建立。 二、精密度 （Precision） 目的：精密度是为了检测仪器测定样品时所产生的误差。 方法：英文文章中，精密度项需要做日内和日间精密度。同一个浓度的样品一天内连续进液相分析6针，根据峰面积算RSD，得到的是日内精密度；连续做3天，三天内的平均峰面积算出RSD，得到的是日间精密度。 结论：日内精密度RSD小于5%时，说明仪器连续测定时精密度良好；日间精密度RSD小于5%时，说明仪器稳定，也包含了药材供试品稳定。 注意事项：做精密度时可以选用药材样品也可以选择对照品，我们在做精密度一般选用药材来做。 三、稳定性（stability） 目的：考察样品的稳定性 方法：取一个样品供试液，在室温下放置适当的时间（具体时间可以根据具体情况来选择），每隔一定的时间对样品进行测试，计算RSD。 结论：在所取时间范围内RSD小于5%，说明样品在所取时间内稳定。 注意事项：取的时间点需要具体事情具体分析。 四、重复性（Repeatability） 目的：考察了取样的准确性，为加样回收做准备。 方法：按相同的方法重复制备同一批次样品6次，计算药材含量，算出RSD。 结论：制备得到的6个样品RSD小于5%，说明取样准确。 注意事项：重复性与日内精密度容易理解混淆，重复性是同一批样品按照相同的制备方法制备6份，每一份进一针分析；而日内精密度是制备一份样品连续进6针分析。 加样回收（accuracy） 目的：确定分析方法的可靠的一个重要指标，也方法学的难点。 方法：取重复性试验所需样品的一半量，按照所测物质含量的50%、100%和150%加入对照品溶液（也可是80%，100%和120%），用重复性试验中样品的制备方法得到供试品溶液，测定物质含量，每个浓度重复三次，计算回收率和RSD。 结论：对于回收率的评价一般要求回收率在95%-105%之间，但作为探索性研究可放宽至90%-110%。 注意事项：药材量减半，所需的对照品量也要按比例折算；同时也要注意，多指标定量时，加入的是混合对照品溶液，不能加入对照品粉末。 中文要求（注意事项同上） 标准曲线 目的：为消除和校正在测定不同浓度的样品时间产生的误差。 方法：配置一份对照品溶液（单一或者混合对照品），进样分析时取不同的进样体积建立标准曲线，不需要做LOD和LOQ。 结论：建立标准曲线时，至少取5个点建立标准曲线且使得样品浓度在标准曲线范围内，得到相应的线性方程，计算出相关系数R，用R来衡量拟合程度，一般要求R需大于0.999才算合格。 二、精密度 目的：精密度是为了检测仪器测定样品时所产生的误差。 方法：精密度只需要一个浓度的样品一天内连续进液相分析6针，根据峰面积算RSD。 结论：精密度小于5%时，说明仪器连续测定时精密度良好。 三、稳定性（stability） 目的：考察样品的稳定性 方法：取一个样品供试液，在室温下放置适当的时间（具体时间可以根据具体情况来选择），每隔一定的时间对样品进行测试，计算RSD。 结论：在所取时间范围内RSD小于5%，说明样品在所取时间内稳定。 四、重复性（Repeatability） 目的：考察了取样的准确性，为加样回收做准备。 方法：按相同的方法重复制备同一批次样品6次，计算药材含量，算出RSD。 结论：制备得到的6个样品RSD小于5%，说明取样准确。 加样回收（accuracy） 目的：确定分析方法的可靠的一个重要指标，也方法学的难点。 方法：取重复性试验所需样品的一半量，用重复性试验中样品的制备方法得到供试品溶液，按照所测物质含量的100%加入对照品溶液，，测定物质含量，重复6次，计算回收率和RSD。 结论：对于回收率的评价一般要求回收率在95%-105%之间。