肾功能不全试验的实验报告.pptVIP

家兔急性肾功能不全 实验目的 复制急性中毒性肾衰动物模型，通过对肾功能指标的检测及肾脏形态学改变的观察，了解中毒家兔肾功能的改变。判断、分析致病因素及导致急性肾衰的可能发病机制。 实验原理 肾脏是一个多功能器官，其主要功能之一是泌尿功能。肾脏通过调节肾血流、肾小球滤过率、肾小管排泌与重吸收以及排泄体内代谢物质以维持机体内环境的稳定。当肾血流量减少，肾小球滤过率下降或肾小管排泌重吸收功能障碍时，肾的泌尿功能受到影响，从而导致肾功能不全。 ARF发病机制的中心环节是GFR的降低。肾血流量减少，肾小管阻塞、肾小管原尿回漏或肾细胞损伤等均可导致GFR的降低。 本实验通过皮下注射1％HgCl2造成家兔急性肾小管性坏死。 通过本实验学习复制急性中毒性肾衰动物模型；观察肾衰家兔的一般状态、酚红排泄率、肌酐清除率等变化；观察急性肾衰时肾脏大体形态；根据实验指标，判断、分析急性肾衰的发病机制及病理生理变化；对急性肾衰的病因、发病机制和功能代谢变化加深理解。 实验对象 家兔2—3kg。 实验药品与器材 1％HgCl2、生理盐水、25％氨基甲酸乙酯、0．6％酚红、20％葡萄糖、10％NaOH、手术器械一套，注射器、试管、加样器、721分光光度计、水浴锅、离心机。 实验步骤 复制肾功能衰竭模型：于实验前一天，取两只家兔，称重，一只皮下或肌肉注射1％HgCl2(o．8～1．0ml／kg)造成急性肾功能衰竭，为实验组兔；另一只皮下或肌肉注射等量的生理盐水(1．0ml／kg)作为对照组兔。 实验步骤 观察：24h后，比较两组动物的一般状态、活动情况与尿量。 家兔称重，耳缘静脉注射25％氨基甲酸乙酯4．0ml／kg，待动物麻醉后，固定于兔台。 角膜反射 夹肢反射 实验步骤 家兔心脏采血3~5ml置于一干燥管中（不抗凝），放置10min后，3000r/min离心15min，小心吸取血清置于另一干燥管中，备测血肌酐 实验步骤 如果心脏采血失败，则颈总动脉采血 颈部正中剪毛，切开皮肤，分离左侧颈总动脉，在动脉下穿两根丝线，用一根丝线结扎动脉的远心端，近心端用动脉夹夹闭，在结扎线下方的动脉壁上剪一小斜口，然后向心脏方向插入动脉导管放血3ml备测血肌酐 实验步骤 分离右侧颈外静脉，插管用于输液。输液速度一定要慢 下腹部正中剪毛，在耻骨联合上约1．5cm处做切口，长约4cm，暴露膀胱，用注射器收集2ml尿液于试管中，做尿肌酐检查。 实验步骤 在膀胱底部，找出两侧输尿管，并分离之。在近膀胱端结扎输尿管，稍等片 刻，待其略充盈后，用眼科剪剪一小口，向肾脏方向插入一细塑料管(塑料管事先用肝素冲洗或充满肝素)，结扎并固定，用于收集尿液。 实验步骤 酚红排泄率测定： 1)两组家兔分别耳缘静脉注射o．6％酚红溶液(1ml／kg)，接着从颈外静脉插管处注射20％葡萄糖溶液(30ml／kg)。收集从开始注射酚红起15min或30min的尿液。换算成单位时间的尿量(ml／min)。 实验步骤 将收集的尿液倒入500ml量筒内，加10％NaOH lOml，用自来水补充至500ml处，混匀后，取出适当量放入与比色管口径相同的试管中与标准比色管比较，得出15min或30min内肾脏酚红排泄率。 实验步骤 肾脏酚红排泄率：是反映肾血流量与肾小管排泌功能的指标。正常情况下从静脉注入酚红后15min或30min，肾脏酚红排泄率分别＞30%与＞45%。 实验步骤 血清和尿液肌酐含量测定——苦味酸沉定蛋白法 原理：在碱性条件下，苦味酸与（血、尿中）肌酐作用，生成黄红色苦味酸肌酐，使溶液呈色后进行比色测定；然后加醋酸，在酸性环境中，黄红色的苦味酸肌酐被清除，非肌酐物质（假肌酐）呈色，两者比色之差为血及尿中肌酐。按表1、表2的操作步骤测定血清及尿液肌酐。 表1 血清肌酐测定 单位（ml） 标准管 测定管 空白管 肌酐标准应用液（0.05mg/ml） 0.20 _ _ 血清 _ 0.20 _ 蒸馏水 _ _ 0.20 碱性苦味酸 2.0 2.0 2.0 实验步骤 混匀，37OC水浴30 min，以510nm波长比色，空白管调零，读OD值，然后，各管加50%醋酸液两滴，放置6min后，在测OD’值。计算： [Cr]p(mg%)=OD测－OD’测/ OD标－OD’标×0.01/0.2×100 正常值:0.7～0.8mg%(1mg%=88.4?mol/L)。 表2 尿肌酐测定 单位（ml） 测定管 标准管 空白管 尿液（原尿或1：50稀释） 0.1 _ _ 尿肌酐标准应用液（0.5mg/ml） _ 0.1 _ 蒸馏水 _ _ 0.1 碱性苦味酸 2 2 2 12．5%NaoH 0.5 0.5 0.5 实