DNA粗提取与鉴定.pptVIP

答：因为DNA不溶于冷酒精，而其他物质可以溶解在酒精中，使含杂质较少的DNA丝状物可以析出,悬浮于溶液中 讨论： （2）观察丝状物呈什么颜色？ 答：白色 （1）为什么要加50mL的冷酒精？ 取两支20 mL的试管，各加入氯化钠的物质的量浓度为0．015 mol／L的溶液5 mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4mlL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热 5 min，待试管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化 ⑧ DNA的鉴定 讨论： 答：有丝状物的试管变成蓝色，另一试管还是原来颜色 （2）这一鉴定结果说明什么问题？ （1）比较两个试管中溶液的颜色有什么不同？ 答：提取出的丝状物是DNA （3） DNA的直径约为20×10-10 m，实验中出现的丝状物的粗细是否表示1个DNA分子直径的大小？ 答： DNA分子直径只有2 nm。丝状物是多个DNA子聚在一起形成的 专题5 DNA和蛋白质技术 湖南邵东三中 杨连进 课题1 DNA的粗提取与鉴定 在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。 当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为 0．14 mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出 ②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？ DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离 6、DNA在酒精溶液中的溶解性 7、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响 ②大多数蛋白质不能忍受60－80°C的高温，而DNA在80°C以上才会变性 ③洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响 8、DNA的鉴定 ① DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂 ②紫外灯照射法 A、配制染色剂，用蒸馏水配制万分之五的溴化已锭（EB） B、将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上，再滴一滴EB溶液染色 C、将蜡纸放在紫外灯(260 nm)下照射（暗室中），可见橙红色的荧光(DNA的紫外吸收高峰在260 nm处) ③甲基绿 （蓝绿色） 二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计 （一）实验材料的选取 1、材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中选取2～3种实验材料） 2、原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大 动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水 ，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 1、动物细胞 答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA 讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ ①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜 2、植物细胞 讨论：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解 ②实例：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行从分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液 答：研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等 讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？ （三）去除滤液中的杂质 为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理 讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？ 答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质 讨论：为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质 答：用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质 讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？ 答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离。 （四） DNA的析出与鉴定 DNA的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒精溶液（体积分数为95 ％） ，静置2－3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取