试验的方案抗寒性.doc

金光杏梅的抗寒性 一、电导率的测定 1.1．实验材料：金光杏梅的枝条 1.2．实验器材：10ml刻度试管，剪刀，电导仪，冰箱，天平，水浴锅，比色皿, 药匙，烧杯 1.3．实验试剂： 　1.3.1．蒸馏水　　1.3.2.去离子水 1.4．试验方法： 　　将供试1年生枝条用自来水和蒸馏水冲洗干净后放入冰箱中分别在，-10、-15、-20、-25、-30、-35的温度梯度下冷冻4小时后取出，放在4摄氏度冷藏冰箱中解冻，然后测其相关指标。每个指标测定重复3次,对照材料沙藏于4摄氏度的条件下。 　　取低温处理后的枝条，用去离子水冲洗干净，避开芽眼，剪成3-5毫米的薄片，混合均匀，称取一克放入刻度试管中，加10毫升去离子水，在室温下静止12小时后测定其初电导值（电导仪型号为DDS-11A）煮沸30分钟后，室温下静止5小时，再测其终电导值，得到相对电导率，logistic方程Y=K(1+ae-bx)(K=100%)计算各样品的半致死温度。 二、丙二醛含量的测定（ＭＤＡ） ２.1．实验材料：金光杏梅的枝条 ２.2．实验器材：10ml试管，剪刀，721型分光光度仪，离心机，离心管３个，研钵研杵，水浴锅，移液枪，玻璃棒，５０ｍｌ烧杯３个，天平，比色皿, 药匙， ２.3．实验试剂： 1.3.1．蒸馏水　 1.3.２.石英砂　　 1.3.３．ＮａｏＨ（氢氧化钠） 1.3.４．１０％ＴＣＡ溶液的配制：称取１０ｇTCA溶于90ml的蒸馏水中。 1.3.５． 0．6%硫代巴比妥酸(TBA)溶液的配制：0.6gTBA先用少量1mol/L NaoH溶解，再用10%ＴＣＡ定容至１００ｍｌ。 ２.4．试验方法： ２.4．１．枝条MDA含量测定采用硫代巴比妥酸(TBA)显色法所用仪器为721型分光光度仪。称取剪碎的金光杏梅枝条1g,加入2ml质量分数为10%的TCA和少量石英砂，研磨。再加8mlTCA进一步研磨，在4000r﹒min-1离心10min，上清液样品提取液。 ２.4．２．显色反应和测定：吸取离心的上清液2ml（对照加2ml蒸馏水），加入2ml质量分数为0.6%的TBA溶液，混匀，将混合物于沸水浴上反映15min,迅速冷却后再离心。取上清液测定450、532和600mm波长下的消光度。 ２.4．３．MDA质量摩尔浓度的计算： MDA质量摩尔浓度/（umol﹒g-1）=【6.45（A532-A600）-0.56A450】﹒N﹒W-1 N---提取液体积（ml）； W---植物组织鲜重（g）. 三、斐林试剂比色法测定还原糖 3.1．实验材料：金光杏梅的枝条 3.2．实验器材：分光光度计，分析天平，离心机，水浴锅，具塞刻度试管，刻度吸管，４个100mL一个２５０ｍＬ容量瓶，研钵，恒温箱，移液管，试管，比色皿, 药匙，烧杯。 3.3．实验试剂： 3.3．1．斐林试剂A液：4gCuSO4·5H2O溶解于蒸馏水定容至100mL?。 3.3．2.斐林试剂B液：20g酒石酸钾钠（KNaC4H4O6·5H2O）与15gNaOH溶于蒸馏水中，并定容至100mL。A、B两液分别贮存，使用前等体积混合。?? 3.3．3. 0.1％葡萄糖标准液：取80℃下烘至恒重的葡萄糖0.1000g，加蒸馏水溶解，定容至100mL?。 3.3．4. 0.1mol/LNaOH。 3.3．5.甲基红指示剂： 0.1g甲基红溶于250mL60％乙醇中。 3.3．6. 10％Pb(Ac) 2?。 3.3．7.饱和Na 2SO4。 3.4．试验方法： ?3.4．１标准曲线的制作取7支试管，按表分别加入各溶液。 还原性糖测定时绘制标准曲线的试剂量 试剂 管号 0 1 2 3 4 5 6 0﹒1%葡萄糖标准液（ml） 0 1 2 3 4 5 6 蒸馏水（ml） 6 5 4 3 2 1 0 每管含葡萄糖量（ml） 0 1 2 3 4 5 6 斐林试剂(ml) 4 4 4 4 4 4 4 　　将以上各管混合后加塞，于沸水浴中加热15?min?。取出后自来水冷却， 1500r/min离心15min。取上清液，用分光光度计在590nm波长下比色，以蒸馏水作对照，读取吸光度。用空白管的吸光度与不同浓度糖的各管的吸光度之差为横坐标，对应的糖含量为纵坐标，绘制标准曲线。 3.4．２?样品中还原糖的提取取新鲜的植物样品洗净、擦干、剪碎，称取3.00g，放入研钵中研磨至糊状，用水洗入大试管中。体积为10～15mL时，加2～3滴甲基红指示剂，如呈红色，可用0.1mol/L的NaOH?中和至微黄色。若用风干样品，可称取干粉3.00g，先在烧杯中用少量水湿润，然后用水洗入250mL容量瓶中，如显酸性，可用上法中和。 ?　将大试管置于80℃的恒温水浴中保温30min，其间摇动数次，以便将还原糖充分提取出来。对含蛋白质较多的样品，此