氨基酸结构与性质(1).pptVIP

(4) 与苯异硫氰酸酯（PITC）反应（Edman反应）：生成苯乙内酰硫脲-氨基酸。 (5) 与丹磺酰氯（DNS-Cl）的反应：碱性环境生成荧光物质DNS-氨基酸。 高效液相色谱 稍息 二十种氨基酸的pK，及等电点： 2.由α-氨基参加的反应： (1) 与亚硝酸反应：放出氮气，氮气的一半来自氨基氮，一半来自亚硝酸，在通常情况下测定生成的氮气的体积量可计算氨基酸的量，此反应可用于测定蛋白质的水解程度。 (2) 与甲醛的反应：用过量的中性甲醛与氨基酸反应，可游离出氢离子，然后用NaOH滴定，从消耗的碱量可以计算出氨基酸的含量。此法称为间接滴定法。 (3) 与2,4-二硝基氟苯（2,4-DNFB）的反应（Sanger反应）：在碱性条件下生成黄色的二硝基苯-氨基酸衍生物。 （3）、(4)、(5)反应用于蛋白质的N-末端的测定。 3.α-羧基参加的反应： (1)与碱反应成盐 (2)与醇反应成酯 (3)与酰化试剂反应成酰氯 4.α-氨基与α-羧基共同参加的反应 与茚三酮的反应：除脯氨酸与羟脯氨酸外，可与其它氨基酸生成蓝紫色化合物。脯氨酸与羟脯氨酸为黄色化合物。 (1)??Millon反应：检测Tyr或含Tyr的蛋白质的反应。 Millon试剂：汞的硝酸盐与亚硝酸盐溶液。 产物：红色的化合物。 (2)??Folin反应：检测Tyr或含Tyr的蛋白质的反应。 Folin试剂：磷钼酸、磷钨酸混合溶液。 产物：蓝色的钼蓝、钨蓝。 (3)??坂口反应：检测Arg或含Arg的蛋白质的反应。 坂口试剂：α—萘酚的碱性次溴酸钠溶液。 产物：砖红色的沉淀。 5.侧链反应（颜色反应）： (4)??Pauly反应：检测His、Tyr及含His、Tyr蛋白质的反应。 试剂：对氨基苯磺酸盐酸溶液、亚硝酸钠、碳酸钠混合溶液 产物：橘红色的化合物。 (5) 乙醛酸的反应：检测Trp或含Trp蛋白质的反应。 当Trp与乙醛酸和浓硫酸在试管中叠加时，产生分层现象，界面出现紫色环。 (6) Cys的反应：Cys或含Cys蛋白质与亚硝基亚铁氰酸钠在稀氨的溶液中，产生一种红色的化合物。 四.氨基酸的分离测定 （一）层析法 层析法是利用被分离样品混合物中各组分的化学性质的差异，使各组分以不同程度分布在两个相中，这两个相一个为固定相，另一个为流动相。当流动相流进固定相时，由于各组分在两相中的分配情况不同或电荷分布不同或离子亲和力不同等，而以不同的速度前进，从而达到分离的目的。 常见的层析法有： 滤纸层析、薄层层析、离子交换层析、亲和层析 * * 1.掌握蛋白质的基本构成单体：氨基酸的结构 特点，从各氨基酸的结构特点上理解氨基酸 的分类。 2.掌握氨基酸的理化性质，重点掌握两性电离 与等电点含义。 3 氨基酸的化学性质及其应用 目的与要求 蛋白质的元素组成 蛋白质是有机化合物，离不开C、H、O三种元素，还含有N、P、S、金属元素等。 含量% ： 50～55 6～7 20～23 15～17 0.3～3 微量或无 元素组成 ： C H O N S 其它 蛋白质中N是特征元素，且含量恒定，为16%左右 ，即16克氮/100克蛋白质，故可以用定氮法测量蛋白质含量，即：每100克蛋白质含氮16克，100/16=6.25克蛋白质含氮1克。所以，每克样品含氮量×6.25×100=100克样品蛋白质含量（克%）。 ??? 有些蛋白质含有其他微量元素：P、Fe、Cu、Mn、Zn、Co、Mo、I 等。 一 蛋白质的水解 1.酸水解 条件：5～10倍的20%的盐酸煮沸回流16～24小时，或加压于120℃水解2小时。 优点：可蒸发除去盐酸，水解彻底，终产物为L-α-氨基酸，产物单一，无消旋现象。 缺点：色氨酸破坏，并产生一种黑色的物质：腐黑质，水解液呈黑色。 2. 碱水解 条件：4mol/L Ba(OH)2或6mol/L NaOH煮沸6小时。 优点：水解彻底，色氨酸不被破坏，水解液清亮。 缺点：产生消旋产物，破坏的氨基酸多，一般很少使用。 3. 蛋白酶水解 条件：蛋白酶如胰蛋白酶、糜蛋白酶，常温37～40℃， pH值5～8 。 优点：氨基酸不被破坏，不发生消旋现象。 缺点：水解不完全，中间产物多。 蛋白质酸碱水解常用于蛋白质的组成分析，而酶水解用于制备蛋白质水解产物。 二、蛋白质分子的基本组成单位——氨基酸 （一）氨基酸的结构通式： 1、构成蛋白质的氨基酸均为L-α-氨基酸。 2、除R为H（甘氨酸）外，其余氨基酸均具有旋光性。 3、各种氨基酸的区别在于侧基R基上。 从氨基酸的结构通式