生物化学核石酸化学.ppt

2、3’末端多聚A的尾巴。 极大多数真核细胞mRNA在3’-末端有一段长约20—200个多聚腺苷酸的polyA。 polyA是在转录后经polyA聚合酶的作用而添加上去的。 原核生物无些结构 polyA的功能： 1、与mRNA从细胞核转移到细胞质有关； 2、与mRNA的半寿期有关，新合成的mRNA， polyA链较长，而衰老的mRNA ，polyA链缩短。 3、真核生物mRNA是单顺反子的，而原核生物的mRNA是多顺反子的。 顺反子：是由顺反试验所规定的遗传单位 相当于一个基因，含有决定一种蛋白质氨基酸序列的全部核苷酸序列。 多顺反子：是指携带一种以上蛋白质合成信息的mRNA 也就是说：原核生物mRNA可编码几条不同的多肽链。 单顺反子：只编码一条多肽链。 （三） rRNA的结构 核糖体RNA（ribosomal RNA，rRNA）， 是细胞内含量最多的RNA，约占RNA总量的80%以上。rRNA与核蛋白体蛋白共同构成核糖体（ribosome） 原核生物 70S 真核生物 80S rRNA的分子结构基本上都是由部分双螺旋与部分突环相间排列而成。 16S rRNA二级结构 大肠杆菌5SrRNA的结构 （一）一般理化性质 1.为两性电解质，通常表现为酸性。 2.DNA为白色纤维状固体，RNA为白色粉末，均微溶于水，不溶于有机溶剂。 3.DNA溶液的粘度极高，而RNA溶液要小得多。 4.RNA能在室温条件下被稀碱水解而DNA对碱稳定。 第四节 核酸的理化性质 （二）核酸的紫外吸收性质 核酸的碱基具有共扼双键，因而有紫外吸收性质，吸收峰在260nm（蛋白质的紫外吸收峰在280nm）。 核酸的光吸收值比各核苷酸光吸收值的和少30~40%，当核酸变性或降解时光吸收值显著增加（增色效应），但核酸复性后，光吸收值又回复到原有水平（减色效应）。 核酸的紫外吸收峰 天然DNA 变性DNA 纯DNA为 1.8 纯RNA为2.0 所以用这一方法可以检测样品是否是纯品 OD260 OD280 （三）核酸的变性、复性和分子杂交 一、核酸的变性 1、核酸（DNA）变性的概念： 高温、酸、碱以及某些变性剂（如尿素）能破坏核酸中的氢键，使之断裂，核酸中的双螺旋区变成单链，并不涉及共价键的断裂，这一过程称为核酸的变性。监测指标为A260的变化。 ?常用的变性方法为加热。 2、变性因素 热力 强碱 强酸 有机溶剂 变性剂 射线 机械力 3.变性DNA的性质 变性能导致DNA 的一些理化性质及生物学性质发生改变 溶液粘度降低 溶液旋光性发生改变 增色效应或高色效应 3.变性温度 通常把DNA的双螺旋结构失去一半时的温度称为DNA的熔点或熔解温度(melting temperature, Tm)。 用Tm表示。DNA的Tm值一般在70～85度之间。 以加热为变性条件，使 DNA 分子双链解开50%所需温度 爆发式：热变性是在变性温度范围内突发的跃变过程，很像结晶达到熔点时的熔化现象，故名熔解温度 狭窄性：变性温度范围很小 变性温度的特点 某些DNA的Tm值 DNA的Tm值大小与下列因素有关： （１）DNA的均一性　 均一性愈高的样品，熔解过程愈是发生在一个很小的温度范围内。 （２）G—C之含量 G—C含量越高，Tm值越高，成正比关系，这是G—C对比A—-T对更为稳定的缘故。 所以测定Tm值可推算出G—C对的含量。其经验公式为： G—C（％）＝（Tm－69.3）×2.44 （３）介质中的离子强度 一般说来，在离子强度较低的介质中，DNA的熔解温度较低，熔解温度的范围也较窄。而在较高的离子强度的介质中，情况则相反。所以DNA制品应保存在较高浓度的缓冲液中或溶液中，故常在1 mol／L的NaCl中保存。 RNA分子中有局部的双螺旋区，所以RNA也可发生变性，但Tm值较低，变性曲线也不那么陡。 1、DNA复性的概念 变性DNA在适当条件下，又可使两条彼此分开的链重新缔合成为双螺旋结构，这一过程称为复性。 热变性DNA经缓慢冷却后即可复性，也称为退火 DNA复性速度受温度的影响。复性时温度缓慢下降才可使其重新配对复性。如加热后将其迅速冷却至4 ℃以下，则不可能发生复性。 比Tm低25℃为DNA复性的最佳条件。 二、核酸的复性 三、分子杂交 定义：在退火条件下，不同来源的DNA互补区形成氢键，或DNA单链和RNA链的互补区形成DNA-RNA杂合双链的过程。 核酸的分子杂交 第五节 病毒和核蛋白 有机体内核酸常与蛋白质结合成复合体称为核蛋白体。 病毒