国外生物制品质量对标准2010年药典会--.ppt

国外生物制品检验方法研究进展 王军志 中国药品生物制品检定所 提纲 一.国际交流促进了质量标准研究与发展 二. 高端理化方法用于生物制品质量研究 三.新生物学活性测定方法的研究 四 .热源检测替代方法研究 一. 国际交流促进了质量标准研究与发展 WHO 英国NIBSC 德国PEI 加拿大CBR 美国USP 测量学（Metrology）： 测量结论基础: 方法验证（Validation） 追溯（Traceablity） 不确定性（Uncertainty） 随着测量技术进步，新的分析测量手段应用于生物测量中，如: 芯片技术开发在基因水平对测序的评价方法。 关于标准溯源（Traceablity Chain）： 国际标准（SI） NMI 药典（Pharmacopoeias） 协作标定实验室（Calibration Labs） 常规测定实验室（Routine Measurement Labs） Bio-measurements主要含义： 1. 采用生物学方法进行测量包括生物测定（Bioassays）、动物水平,细胞水平,分子水平的定量测定等。 2. 对生物制品本身结构特性的测定，如圆二色分析蛋白质、分子结合物表面共振分析等。 对于复杂的蛋白分子，理化测定方法虽然可以提供比较多的结构信息，但其不能完全反映蛋白质的高级结构。虽然生物学活性的测定值可信限范围比较大，但其作为特异的定量方法仍被广泛应用。 只有在理化结构的测定比较全面彻底，并且理化测定方法与生物学活性测定方法关系明确，同时生产工艺稳定时，理化方法才可以替代生物学活性测定方法。 近年来随着新技术、新产品的出现，而使生物测量的含义不断得到充实和扩展： 基因递送体系的发展（基因治疗） 细胞治疗的发展（干细胞治疗） 生物相似性概念的发展 NIBSC在生物测量中有三个比较突出的进展： 免疫反应定量检测方法 将蛋白质组学技术用于疫苗的质量分析 生物测定终点法的合理发展（“Rational development of bioassay end-points.”） 英国NIBSC重点研究方向： 针对基因治疗载体的分析方法研究 干细胞分化状态下，抗原表达分析 治疗用糖蛋白生物活性与糖基化相关性研究 细胞因子治疗病人的抗体分析标准方法 采用定量、伦理方式改善及替代测定方法 以毒素效价为基础的毒性评价方法 NIBSC将蛋白组学在疫苗质量控制中的应用： 以Meningococcal OMV vaccine为例， 采用I-D SDS电泳法，可以得到29条区带，采用质谱分析出40种蛋白多肽的序列。其中证明7种为关键抗原成份。 采用二维电泳法（2D）发现152斑点，采用MS/MS法分离出74个多肽位段可以代表41个不同基因的产物。 采用2D法分析两个企业同类产品，斑点数有显著差异。 免疫蛋白组学可以通过分析混合蛋白，研究哪些是有用，哪些是无用的，从而确定抗原保护成份。 生物测定终点法 以细胞早期分子变化测定为基础： VEGF的生物学测定采用细胞内信号变化进行。q-PCR检测mRNA表达水平。通过IL-8mRNA诱导的VEGF活性测量。 通常采用抗病毒检测法测定β-干扰素活性需要3天，而q-PCR法8小时就可以达到目的。 RNA可直接通过细胞裂解物测定，不需要纯化或酶处理。 生物测定终点法的发展（Bioassay end-point development）： q-PCR方法可直接测定细胞早期的成份变化，可减少差异，改善灵敏度。 内源性mRNA的测定不需稳定感染细胞的传代，并作为基因检测的报告实例。 该技术可用于检测参考品和治疗产品效价，还可用于对更复杂材料（如血清）的诊断测定（中和抗体）。 提高生物测定速度，如q-PCR法与传统理化测定技术共用，可以在线监测产品质量。 出访情况简介 访问时间：2009年5月3～7日 地点：渥太华，加拿大卫生部生物制品质量研究中心（Center for Biologics Research, CBR） 人员:王军志 叶强 李长贵 内容：参加“中加生物制品质量控制 研讨会”并访问CBR 与批签发部门的交流 疫苗批签发由生物制品评价中心的实验室承担 批签发实行分级管理，根据生物制品的种类、风险性进行评估，将其分为四个等级，如新疫苗和活疫苗为最高等级，除资料审核外，还需进行关键项目的实验室检测，最低等级的制品只进行资料审核。 分级管理是动态的 对CBR研究特色的体会 生物/化学/分离方法的有机