角蛋白结时构功能与角蛋白遗传病.ppt

角蛋白结构功能与角蛋白遗传病 西安交通大学第二附属医院皮肤科 肖生祥 冯义国 任小蓉 李建国刘艳 李小莉 彭振辉谭升顺 冯捷 王俊民 角蛋白结构与功能 角蛋白遗传病基因突变和临床系列研究 角蛋白简介 角蛋白是上皮细胞的主要结构蛋白，构成细胞骨架中间丝（微丝、微管、中间丝） 角蛋白 目前已知49种,34种细胞角蛋白,15种毛 发角蛋白 角蛋白的结构 I型： II型： L1、L2、L12 连接区（Linker domains) 1A、1B、2A、2B 螺旋区（Helical domains) V1、V2 可变区（Variable domains) H1、H2 同源区（ Homology regions） ISIS ISIS基元 （ISIS motif) S 反向螺旋序列（Stutter sequence) HIP/HTP 角蛋白基因结构 I型： II型： 角蛋白不同结构区氨基酸数统计 角蛋白序列的保守性 1. 不同个体之间的保守性:1A起始部和2B末端 15-20aa 2. 不同角蛋白之间的保守性 螺旋起始区: I型 1A区第7个aa始 LNDRLASY II型 LNNKFASY 螺旋终止区: EIATYRKLLEGE(如K1 2B末端倒数第5个氨基酸) 角蛋白功能 参与上皮细胞角化、分化； 机械性支持维持细胞形态； 细胞内物质运输、信息传递 角蛋白基因敲除小鼠的表型 角蛋白与疾病 角蛋白 疾 病 K1、K10 大疱性鱼鳞病样红皮病 K5、K14 单纯型大疱性表皮松解症 K6、K16、K17 先天性厚甲 K8、K18 隐匿性肝硬化 K9 表皮松解性掌跖角化症 hHb6、 hHb1 念珠状发 K7、K15、K19、K20 不清楚 角蛋白中间丝的装配 角蛋白遗传病基因突变 和临床系列研究 技术路线和实验方案 患者家系基因突变分析 收集患者家系临床资料、病理标本、采集外周血 提取外周血基因组DNA PCR扩增外显子 DNA序列分析 患者正常人同源性分析 确定基因突变位点 排除多态性 先天性厚甲症（Pachyonychia congenita，PC）是一组常染色体显性遗传病，特点是甲营养不良和不同程度的外胚叶发育不良。 根据临床表现主要分为两型 先证者及其子的厚甲 先证者头部多发性脂囊瘤 先证者及其子的多发性脂囊瘤 先证者及其子的局灶性掌跖角化 研 究 方 法 2. 外周血基因组DNA提取 用全血基因组DNA纯化试剂盒提取基因组DNA。 3. 聚合酶链反应（PCR） K17P8和K17P10扩增的DNA片段稀释1:10000倍作为巢式PCR模板。 巢式PCR的上游引物序列为： 5′-GCTGCTACAGCTTTGGCTCT- 3′；下游引物序列为5′-CACGACGTTGTAAA ACGACCAGTCACGGATCTTCACC- 3′。 PCR反应：总体积为50μl,反应液成分包括5μl缓冲液，10mmol/L dNTP 1μl，25μmol/L上、下游引物各1μl， Taq酶0.5μl（2.5U），25 mmol/L MgCl2 5μl,模板10μl。 反应条件： 4.基因测序 PCR产物采用全自动DNA测序仪进行序列测定，测序结果进行同源性分析。 结 果 1. DNA提取结果 外周血全基因组DNA提取后电泳，可见其大