生化chapt前er03-07aminoacidsandproteins-1.ppt

* * * 半胱氨酸的巯基能打开乙撑亚胺（又称氮丙啶）的环，生成S-氨乙基半胱氨酸（AECys）。 可用于巯基的保护。 4.4.1 半胱氨酸侧链上巯基参与的反应 巯基很容易受空气或其它氧化剂氧化，一种是半胱氨酸氧化形成二硫键。（disulfide bond），生成胱氨酸，-SH与-S-S-自成一氧化还原体系，在机体氧化还原作用中起一定作用。 4.4.1 半胱氨酸侧链上巯基参与的反应 二硫键：是由二个半胱氨酸残基的侧链之间形成的。即胱氨酸的残基中的二硫键。 二硫键类型：可以使两条单独的肽链共价交联起来（链间二硫键）；也可以使一条链的某一部分形成环（链内二硫键）。 4.4.2 侧链R基参加的重要颜色反应 米伦试剂为硝酸汞、亚硝酸汞、硝酸和亚硝酸的混合液；当蛋白溶液中加入米伦试剂后即产生白色沉淀，加热后沉淀变成红色；由于酚类化合物有此反应，酪氨酸含有酚基，故有此反应。 Tyr中的酚基能将Folin试剂中的磷钼酸及磷钨酸还原成蓝色化合物（钼蓝和钨蓝的混合物），利用该反应，可以检测Tyr或含Tyr的蛋白质。 芳香族氨基酸，特别是Tyr、Trp或含Tyr、Trp的蛋白质在溶液中遇到硝酸后，先产生白色沉淀，加热则变黄，再加碱颜色加深为橙黄色。这是因为苯环被硝化，产生了硝基苯衍生物。皮肤、毛发、指甲遇浓硝酸都会变黄。 坂口反应:Arg的胍基能与次氯酸钠（或次溴酸钠）及α-萘酚在氢氧化钠溶液中产生红色物质，可用来鉴定含有Arg的蛋白质，也可用来定量测定Arg的含量。 乙醛酸反应 凡含有吲哚基的化合物都有乙醛酸反应，由于Trp含有类似结构，因此Trp或含Trp的蛋白质都有此反应。在Trp或含Trp的蛋白质溶液中加入乙醛酸，并沿试管壁慢慢注入浓硫酸，在两液层之间就会出现紫色环。 4.4.2 侧链R基参加的重要颜色反应 5 氨基酸的光学特性 Lined up by similarity: chiral to chiral, COO to CHO Rules for description of chiral centers in the (R,S) system 6 氨基酸的分离纯化结构鉴定 * * * 丙氨酸pI的计算 C O O－ C H+H+ H 3 N + CH3 K1 C O O H C H H 3 N + CH3 C O O－ C H H 2 N CH3 K2 Ala+ Ala ± Ala－ K1=[Ala±][H+]/ [Ala+] [Ala+]= [Ala±][H+]/ K1 K2=[Ala－][H+]/ [Ala±] [Ala－]=[Ala±] K2/ [H+] 到达等电点时， [Ala+]= [Ala－] ∴[Ala ±][H +]/ K1 = [Ala±] K2/ [H +]，即： K1 K2 = [H +]2 两边取负对数：－lg [H +]2= －lg K1－lg K2 ∵ －lg [H +] =pH －lg K1 = pK1 － lg K1 = pK2 ∴2pH = pK1 ＋pK2 令pI为等电点时的pH， 则： pI＝ （pK1 ＋pK2）/2 +H+ 3.2.2 氨基酸的等电点 天冬氨酸pI的计算 Asp+ Asp ± Asp － C O O H C H H 3 N + CH2 C O O H C O O－ C H H 3 N + CH2 C O O H C O O－ C H CH2 C O O K1 KR K2 Asp = C O O－ C H H 2 N CH2 C O O － 等电点时为Asp ± ∴ pI＝ （pK1 ＋pKR）/2 H 3 N + － 3.2.2 氨基酸的等电点 赖氨酸pI的计算 Lys+ + Lys + Lys ± C O O H C H H 3 N + (CH2)4 NH3+ C O O－ C H H 3 N + (CH2)4 NH3+ C O O－ C H H 2 N (CH2)4 NH3+ K1 K2 KR Lys － C O O－ C H H 2 N CH2 NH2 等电点时为Lys ± ∴ pI＝ （pK2 ＋pKR）/2 3.2.2 氨基酸的等电点 pI = (pK1+pKR)/2 pI = (pKR+pK2)/2 侧链不含解离基团的中性氨基酸，其等电点是它的pK’1和pK’2的算术平均值：pI = (pK’1 + pK’2 )/2 同样，对于侧链含有可解离基团的氨基酸，其pI值也决定于两性离子两边的pK’值的算术平均值 酸性氨基酸：pI = (pK’1 + pK’R)/2 碱性氨基酸：pI = (pK’2 + pK