乳品微生物检说测-5.ppt

乳品微生物检验实验技能培训 王芸 2010-03-11 无菌室的使用与管理 保持清洁整齐 每2-3周用消毒液擦拭工作台等 定期检查室内空气无菌状况 无菌室杀菌前，应将所有物品置于操作部位，然后打开紫外灯杀菌30分钟。 进入无菌室前，必须咋缓冲间更换消毒过的工作服、工作帽和工鞋。 操作应严格按着无菌操作规定进行。 灭菌方法 高压蒸汽灭菌 火焰灭菌 高温干燥灭菌 一般消毒 空气的消毒 无菌操作要领 进行无菌室空间的消毒 检验用的有关器材，搬入无菌室之间必须分别进行灭菌消毒 操作人员必须将手清洗消毒，穿戴好无菌工作衣、帽和鞋才能进入 进入无菌室后再消毒手部，然后才能进行检验操作。 无菌操作注意事项 动作要轻、不能太快 操作应在近火焰区进行 接种环、针等金属器材使用前后均需灼烧，灼烧时先通过内焰 使用吸管时，切勿用嘴直接吸吹 打开平板时，务必靠近火焰区操作 进行可疑菌涂片是，应使用夹子 工作结束，收拾好工作台，最后用消毒液擦拭 细菌和真菌的比较： 细菌细胞的结构与功能 细菌细胞结构包括基本结构和特殊结构 基本结构式各种细菌共有的，如细胞壁 特殊结构只有某些细菌具有，如芽孢 细菌细胞结构示意图 细菌的繁殖与生长 细菌的分类 球菌 杆菌 芽孢 芽孢是某些细菌的休眠体 圆形或椭圆形，壁厚抗逆性强，含水少 在休眠期间不能检测出任何代谢活力 产芽孢细菌的种类 芽孢的构造 芽孢的形成于芽孢的萌发 芽孢的耐热机制 研究芽孢的意义 芽孢的特性 芽孢有极强的抗热、抗辐射、抗化学药物、抗静水压、惊人的休眠能力等。 肉毒梭菌芽孢，100℃5.0～9.5h；121℃10min； 热解糖梭菌营养细胞，50℃短时间；芽孢132℃4.4min杀死90%。 芽孢的抗紫外线能力，要比其营养的细胞强约1倍。巨大芽孢杆菌芽孢的抗辐射能力要比E.coli的营养细胞强36倍。 芽孢的休眠能力十分惊人 休眠期间，无任何代谢活力。普通条件下可保存几年至几十年的活力。从德国的一个植物标本上分离到保存了200～300年的枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌；凝结芽孢杆菌和环状芽孢杆菌的芽孢保存了50～100年之久。有些湖底沉积土中的芽孢杆菌经500～1000年后仍有活力，更有经2000年甚至更长时间仍保持芽孢生命力的记载。最极端的一个例子是在美国的一块有2500万—4000万年历史的琥珀，至今从其中蜜蜂肠道中还可以分离到有生命力的芽孢。 产生芽孢的细菌种类 主要是芽孢杆菌科（G+菌）两个属，即好氧性的芽孢杆菌属和厌氧性的梭菌属。 球菌只有芽孢尿八叠球菌属形成芽孢。 典型的螺旋菌中，至今未发现产芽孢菌。 芽孢形成 当环境中营养缺乏及有害代谢产物累积时，开始形成芽孢。 有些种在正常生长过程中，形成芽孢。 从形态上来看，芽孢形成可分7个阶段：①束状染色质形成；②细胞膜内陷，细胞发生不对称分裂，其中小体积部分即为前芽孢 ；③前芽孢的双层隔壁形成，这时抗辐射性提高；④在上述两层隔壁间充填芽孢肽聚糖，合成DPA，累积钙离子，开始形成皮层，折光率增高；⑤芽孢衣合成结束；⑥皮层合成完成，芽孢成熟，抗热性出现；⑦芽孢囊裂解，芽孢游离。 芽孢萌发 由休眠状态的芽孢变成营养状态的细菌的过程，称为芽孢萌发。主要分为活化、出芽、生长。 ①活化（萌动）：可由短期加热、低PH值、还原剂、萌发剂等处理而引起，例如，有的芽孢休眠七天后60℃5分钟即可变为营养体。 L-丙氨酸、MN2﹢、表面活性剂（N-十二烷胺）和葡萄糖等可促进发芽，D-丙氨酸和重碳酸钠等可抑制某些芽孢发芽。注意：活化作用是可逆的。故活化处理以后必须立即将它接种到合适的培养基上。 芽孢萌发 ②发芽：芽孢衣中富含半胱氨酸的蛋白质的三维空间结构发生可逆变化，芽孢透性增加，促进与发芽有关的蛋白酶活动。接着，芽孢衣上的蛋白质逐步水解，外界阳离子不断进入皮层，随之皮层发生膨胀、溶解和消失。外界水分不断进入核心部分，使核心膨胀、各种酶类活化，并开始合成细胞壁。核心部分开始迅速合成DNA、RNA和蛋白质。从极向或侧向伸出芽管。芽孢发芽，变成营养细胞。 芽孢发芽时，它的细胞壁还是很薄和不完整的，增加了接受外来DNA，发生遗传转化的可能性很大；同时，抗性明显下降，是灭菌的好时机。 芽孢抗热机制：渗透调节皮层膨胀学说 ①芽孢衣对多价阳离子和水分的透性差； ②皮层含有大量的交联度低（--6%）、负电荷强的芽孢肽聚糖，与低价阳离子一起引起皮层的高渗透压，夺取核心水分，造成皮层含水量增加（70%左右），体积增大，充分膨胀；核心部分的生命物质形成高度失水状态，各层次尤其是皮层与核心间，含水量的差别很大，产生极强的耐热性。 有人认为，芽孢含大量DPA-Ca，Ca2+ 与DPA的螯合作用会使芽孢中的生物大分子形成一种耐热性的凝胶。 研究芽孢的意义 细菌鉴定的一项重要形态学指标