羧甲基茯苓多糖的制备及抗肿瘤药效学研究.doc

DOC格式论文，方便您的复制修改删减 羧甲基茯苓多糖的制备及抗肿瘤药效学研究 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 【摘要】 　　目的 探讨羧甲基茯苓多糖的制备方法及其抗肿瘤活性。方法 在卤代酸存在下一步法简便制备羧甲基茯苓多糖，并分别研究其体内、体外抗肿瘤活性。结果 同对照组相比，羧甲基茯苓多糖在抑制昆明种小鼠H22肝癌细胞及小鼠肿瘤U14 细胞活性方面具有显著效果。结论 通过简便方法制备得到了可显著提高荷瘤小鼠免疫力的羧甲基茯苓多糖，适当剂量的羧甲基茯苓多糖具有良好的抗肿瘤活性。 【关键词】 羧甲基茯苓多糖 制备 抗肿瘤活性 　　【Abstract】 Objective To study the preparation and the antitumor effects of carboxymethyl pachyman.Methods Carboxymethyl pachmaran was prepared conveniently in onestep process with the presence of halogenated acid. The antitumor effects of carboxymethyl pachmaran in vivo and in vitro were studied respectively.Results There were significant effect of the carboxymethyl pachyman for inhibition on murine 22 hepatocarcinoma cell and murine U14 Cancer Cells comparing with control group.Conclusion Carboxymethyl pachyman can be prepared conveniently. Proper dose of carboxymethyl pachyman has a good antitumor effect. 　　【Key words】 carboxymethyl pachyman；preparation；antitumor effect 　　茯苓为常用中药，亦属于壮药的一种，最早见于唐代《新修本草》：“…今调营而理胃，上品仙药也。善能断谷不饥，为药无朽蛀…”(卷十二)［1］，为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf的干燥菌核，具有健脾利术，宁心安神等功效。茯苓菌核中的β茯苓多糖约占茯苓菌核干重93％，具有多种生理活性［2］，但茯苓多糖不溶于水,不便于临床应用，抗肿瘤活性也不显著。将茯苓多糖羧甲基化可得到具有强抗肿瘤活性的水溶性多糖：羧甲基茯苓多糖(Carboxymethyl pachymaran，简称CMP)，研究发现，羧甲基茯苓多糖能直接抑制肿瘤细胞的生长，显著减轻恶性肿瘤患者化疗、放疗的毒副反应，并且能使患者的免疫功能得到很大程度的改善［3］。本文报道一种较为简便的CMP制备方法，并分别从体内、体外两个角度研究其抗肿瘤活性。 　　材料与方法 　　1.材料 　　（1）实验动物 　　清洁级ICR/JCL品系小鼠由中科院广州生物医药与健康研究院实验动物中心提供，昆明种小鼠由中山大学实验动物中心提供。 　　（2）实验药品 　　羧甲基茯苓多糖由自制白茯苓合成，白茯苓制法：茯苓采至广西百色市乐业县山区，将采集的鲜茯苓经去杂去沙→分等→发汗→剥皮→切制(白、赤分开)→日晒至六成干→回润→日晒或烘至全干等工艺制得。二氯乙酸、异丙醇、氢氧化钠等均为分析纯，购自上海化学试剂公司。 　　（3）主要仪器 　 　　干燥箱，分析天平，100目筛；Thermo Forma 3110二氧化碳培养箱，2010型酶标仪（ELISA Reader 2010），SCWCJ超净工作台，CK4032NFL荧光倒置显微镜等。 　　2.方法 　　（1）羧甲基茯苓多糖的简便制备 　　取自制白茯苓（去皮茯苓菌核）进一步烘干（95℃左右），粉碎，过100目筛备用；称取上述制备的25 g茯苓粉，加入至100 ml异丙醇溶剂中，加入1%氢氧化钠溶液50 ml，搅拌使碱液溶解后，在快速搅拌条件下，通过真空滴液漏斗滴入二氯乙酸的异丙醇溶液(1∶1.2，50 ml)，控制温度在50℃搅拌反应3.5小时。反应结束后将上层异丙醇倾出并回收利用，下层加入5%盐酸溶液，快速搅拌下加入乙醇50 ml, 过滤，固体物部分溶解于水中，用乙醇沉淀，过滤，干燥，得白色粉末状固体，即羧甲基茯苓多糖。波谱