lynch综合征免疫组化筛查.pptVIP

中山大学附属肿瘤医院病理科 Lynch综合征 常染色体显性遗传病 致病基因位于常染色体上，且单个等位基因突变即可致病 错配修复基因（MLH1，MSH2，MSH6，PMS2，EPCAM）发生胚系突变 免疫组化检测显示MMR蛋白缺失 占全部CRC的3-5% 常规分子筛查方法的选择 90%的LS 肿瘤表现为MSI-H或dMMR 10-15%的散发性CRC表现为MSI-H或dMMR 由于MLH1 基因启动子的异常甲基化 单纯分子筛查不能确诊LS IHC：正常情况下MMR蛋白均正常表达 任意一蛋白表达缺失→相关基因的突变检测 MLH1缺失→排除MLH1启动子区高度甲基化 MSI：MSI-H指5个微卫星标志物中存在≥2个的改变 IHC/MSI 假阴性率均约5%-10% 常规分子筛查方法 IHC或MSI均可 IHC成本效益更优 Lynch综合征的IHC特征 为何多数情况下MLH1和PMS2， MSH2和MSH6是成对缺失？ MLH1和 PMS2 构成异二聚体，dPMS2通常由于MLH1突变所致 单纯PMS2 或MSH6缺失 除了PMS2之外，MLH1 蛋白还有其他形成二聚体的成员，因此， PMS2基因胚系突变不一定导致MLH1表达缺失。 MLH1 PMS2 表达缺失 大概占15% 80% 是由于 MLH1 过度甲基化所致 其中20% 可能是 LS BRAF 突变检测 MLH1 MSH2 MSH6 PMS2 MSH2 MSH6 表达缺失 大概约占3% 大部分是由于MSH2 和 MSH6 基因突变 经常是LS患者 MLH1 PMS2 MSH6 MSH2 IHC结果解读:MLH1和PMS2 IHC结果解读: MSH2和MSH6 IHC结果解读 Lynch综合征的CRC形态学特征 MSI-H结直肠癌组织学特征 组织学低分化 肿瘤异质性大 形态上呈现髓样分化 低分化结直肠腺癌亚型 肿瘤细胞片状分布 核空泡状、核仁明显 淋巴细胞浸润肿瘤细胞 绝大部分CRC髓样亚型呈现MSI-H,且预后比其他低分化癌好 重视Lynch-like形态特征 分子筛查需要注意的问题 分子筛查策略适用于CRC和子宫内膜癌 其他LS肿瘤分子筛查有效性的数据十分有限 BRAF突变排除MLH1的过度甲基化对于CRC以外的肿瘤并不适用 直肠癌组织中MSH6 缺失可能是治疗后改变 IHC 异常和/或MSI -H但相关基因检测未发现胚系突变者仍有可能是Lynch 综合征患者 体细胞MMR 基因检测来评估体细胞突变有助于解释Lynch-like综合征 免疫组化筛查相关问题 免疫组化检测技术标准化（自动vs手动） 标本及时标准固定、避免修复过度 IHC检测蜡块的选择（有正常对照） 重视lynch-like形态学特征 免疫组化结果判读（阴性与阳性） 对于IHC 检测结果不理想（重复或分子检测） 免疫组化需重新检测各种情况 假阴性-阳性对照不表达 阳性对照及肿瘤细胞表达太弱 肿瘤细胞表达异质大 假阳性-肿瘤细胞阳性、正常细胞阴性 肿瘤细胞定位不准 阳性细胞定位不清晰 非特异性强染色 免疫组化需重新检测各种情况 肿瘤标本固定不及时 标本固定不够充分 MMR蛋白抗体不特异 免疫组化检测前后不符的原因分析 抗原修复过度 抗体孵育时间过长 DAB染色时间过长 Lynch 综合征IHC 和MSI 检测原则 总体原则 ? IHC 和MSI 检测是评估个体罹患LS 风险的经典检测手段（无论是单独进行还是联合检测），尤其是针对结肠癌和子宫内膜癌组织。超过90%的LS 肿瘤表现为MSI-H（微卫星高度不稳定），和/或IHC 检测至少一个错配修复蛋白表达缺失。不同于LS（是一种错配修复基因或EPCAM基因的遗传性突变），大约10%-15%的散发性结肠癌由于MLH1 基因启动子的异常甲基化，也可以表现为IHC 异常和MSI-H。因此，尽管IHC检测发现异常MLH1 蛋白增加了患者为LS 的可能性，但无法由此而确诊。只有那些发生胚系突变的患者才是真正的Lynch 综合征。 ? Bethesda 标准（见LS-B）旨在辨别需要进一步检测错配修复缺陷的结直肠癌患者，并由此富集可能LS 患者。尽管它比阿姆斯特丹标准（见 LS-C）更加敏感，但仍有近50%的LS 患者并不符合改良版Bethesda 标准。 IHC ? IHC 检测是指对肿瘤组织进行染色，以检测LS 患者中已知4 个突变错配修复基因的蛋白产物：MLH1, MSH2, MSH6 和PMS2 基因的蛋白产物。 正常情况下，IHC 检测提示4 个错配修复蛋白均正常表达。异常的检测结果往往显示至少1 个上述蛋白表达缺失，由此提示可能存在相关基因的遗传性突变。IHC 检测发现的任意一个蛋白表达缺失均是明确指征进行该相关基因的突变检测。 ? IHC