第八章-血清酶类测定.pptVIP

三、胆碱酯酶 (一)生物化学特征 胆碱酯酶(ChE)是一类催化酰基胆碱水解的酶类。 人体主要有两种，即乙酰胆碱酯酶(AChE)又称真性胆碱酯酶或胆碱酯酶Ⅰ、丁酰胆碱酯酶(BuChE)又称假性胆碱酯酶或称拟乙酰胆碱酯酶(PChE)或胆碱酯酶Ⅱ。 临床常规检查的胆碱酯酶(SChE)即指后者，通常简称为ChE。 丁酰硫代胆碱法是目前测定血清ChE最常用 的方法。测定原理如下： 丁酰硫代胆碱+H2O 在405nm波长连续监测测定吸光度值的变化，即可计算血清ChE的活性浓度。 本法简便、快速，易于自动化。但只能测定血清ChE，而不能测定红细胞AChE。 (三) 临床意义 血浆或血清中AChE的含量甚微，临床上测定红细胞中的AChE用于有机磷中毒的诊断。 由于ChE在肝脏合成后立即释放到血浆中，故是评价肝细胞合成功能的灵敏指标。肝、胆疾病时ALT、γ-GT均升高，往往难以鉴别，如增加血清ChE测定，可发现ChE降低者均为肝脏疾患，而正常者多为胆道疾患。 血清ChE减少主要见于肝病和有机磷中毒 增加主要见于肾病综合征 （四）α-羟丁酸脱氢酶测定 α-HBD反应式为： 　　　　　　　　　 α-HBD α-酮戊二酸 + NADH + H+　 α-羟丁酸 + NAD+ 测定方法 1.比色法 2.速率法 　临床意义： 1.α-HBD主要存在于心肌中，与AST、LDH、CK、CK-MB和 α-HBD构成心肌酶谱。 当急性心肌梗死时，α-HBD与AST波动幅度相似 发病2~3d时活性达到峰值，其后下降 11~16d后恢复正常。 α-HBD还见于心肌炎。 α-HBD与LDH的比值可判定LDH是来源于肝还是来源于心脏。 正常人LDH/α-HBD为1.2-1.6 实质性肝病LDH/α-HBD为1.6-2.5 心肌梗死LDH/α-HBD为0.8-1.2 　谢　谢！ * 血清 血清肌酸激酶（CK）活性测定 在肌酸激酶的催化下，磷酸肌酸与ADP反应生成肌酸和ATP，肌酸与双乙酰、α-萘酚结合生成红色化合物。这种红色化合物在一定范围内与肌酸量呈线性关系，在540nm波长处与同法处理的肌酸标准液比色，求得血清CK的活性。 pH6.7 CrP + ADP Cr + ATP (磷酸肌酸) (肌酸) 【试剂与仪器】 1． Tris-HCl缓冲液(pH 7．4) 2． 12mmol／L磷酸肌酸溶液 3． 4mmol／LADP溶液 4． 混合底物溶液 5. 50g／L硫酸锌溶液 6. 60/L氢氧化钡溶液 7． 贮存碱液 8． α-萘酚溶液 9． 双乙酰溶液 10．1.7mmol／L肌酸标准液 11. 器材 试管、恒温水浴箱、刻度吸管、微量移液器、 定时钟、分光光度计。 实验步骤 加入物(m1) 空白管 标准管 测定管 血清 一 一 0.1 肌酸标准液 一 0．1 一 蒸馏水 0．1 一 一 混合底物液 0．75 0．75 0．75 混匀，37℃水浴30分钟 氢氧化钡溶液 0．5 0．5 0．5 硫酸锌溶液 0．5 0．5 0．5 蒸馏水 0．5 0．5 0．5 充分振荡，混匀后离心(2000r／min)10分钟，取上清液 上述上清液 0．5 0．5 0．5 a一萘酚溶液 1．0 1．0 1．0 双乙酰溶液 0．5