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4．稳定性检验 药品的稳定性是评价药品有效性和安全性的重要指标之一，也是确定药品贮藏条件和使用期限的主要依据。 采用恰当的物理化学、生物化学和免疫化学技术对其活性成分的性质进行全面鉴定，要准确检测在贮藏过程中由于脱氨、氧化、磺酰化、聚合或降解等造成的分子变化。 5．产品一致性的保证 以重组DNA技术为主的生物制药是一个十分复杂的过程，生产周期可达一个月甚至更长，影响因素较多。需要对原料—生产—产品的每一环节都进行严格的控制和质量检定，才能确保各批最终产品都是安全有效、含量和杂质限度一致并符合标准。 五、产品的保存 1、液态保存 （1）、低温保存 （2）、稳定pH条件下保存 （3）、高浓度保存 （4）、加保护剂保存 蛋白质的稳定剂有糖类、脂肪类、蛋白质类、多元醇、有机溶剂等；有些蛋白质在高离子强度的极性环境下才能保持其活性，加入中性盐可稳定这些蛋白质；某些蛋白质表面或内部含有半胱氨酸巯基，容易被空气中的氧缓慢氧化为次磺酸或二硫化物，使蛋白质的电荷或构象发生改变而失活，可加入2-巯基乙醇、二硫苏糖醇等，在真空或惰性气体中密闭保存。 2、固态保存 固态蛋白质比液态稳定，一般蛋白质含水量降到5％时，在室温或冰箱中保存均比较稳定，但在37℃保存时活性则明显下降。 长期保存蛋白质的最好方法是把它们制成干粉或结晶。冻干粉或结晶都具有强抗热性和稳定性，在干燥器中，4℃以下可保存相当长的时间。 第三章 基因工程制药思考题（4） 1、设计一个实验方案用基因工程的方法生产人干扰素α2b。 2、常用的基因工程药品的保存方法有哪些？ 第八节　基因工程药物制造实例 一、干扰素 二、人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 三、人白细胞介素-2 四、美洲商陆抗病毒蛋白 　　　 干扰素（interferon，IFN）是人体细胞分泌的一种活性蛋白质，具有广泛的抗病毒、抗肿瘤和免疫调节活性，是人体防御系统的重要组成部分。根据分子结构和抗原性的差异分为α、β、γ、ω等4个类型。α型干扰素在分为ɑ1b，ɑ2a ，ɑ2b等亚型，其区别表现在个别氨基酸的差异上。 一、干扰素基因工程菌的组建流程 诱生的白细胞 提取全RNA 通过寡dT-纤维素柱 蔗糖密度梯度 获得寡A的mRNA 离心提取12s 的 mRNA 逆转录成cDNA 双链cDNA接上dT或dG尾 pBR322质粒 pBR322质粒加上dA或dC 退火获的杂交质粒 转化大肠杆菌 扩增杂交质粒 筛选抗青霉素但对氨苄 青霉素敏感细菌克隆 用杂交翻译法挑选 含干扰素cDNA克隆 将干扰素cDNA克隆入表达载体 在大肠杆菌中进行高效表达 二、基因工程干扰素的制备 启开种子 制备种子液 发酵培养 粗提 精提 半成品制备 半成品检定 分装 冻干 成品检定 成品包装 制备基因工程干扰素ɑ的工艺流程图 三、人ɑ2b型干扰素(hIFN—ɑ2b)工程菌株的组建过程 应用PCR的方法，从人的染色体片段制备人ɑ2b干扰素的cDNA，将其克隆到pRC23表达载体上，构建成重组表达质粒pMZI2B，并转化大肠杆菌DH5a，组建成工程菌株。由于pMZI2B的ɑ2b基因5’端起始密码ATG上游编制了一段SD顺序，与PL启动子上连接的SD顺序组成双SD顺序，所以克隆基因的表达水平有明显的提高。 1. hIFN-ɑ2b基因的获得 用于克隆的人ɑ2b干扰素基因是应用PCR方法从带有人ɑ2b干扰素基因的染色体片段获得的：模板DNA 4ng，引物为50pmol/L，各25μL 4×dNTP 4μL，TaqDNA聚合酶2.5μL，10×PCR反应缓冲液10μL，补水使总反应体积为100μL。反应条件：变性温度为94 ℃，退火温度为50℃，链延伸温度为72 ℃ 。共30个循环。 采用PCR技术扩增的人ɑ2b干扰素基因片段，经1%琼脂糖凝胶电泳分离，其片段大小约相当于0.55kb。将该片段插入质粒pGEM-3的EcoR I和BamH I的位