差异表达基因的高通量筛选方法.pdf

细胞生物学杂志 Chinese Journal of Cell Biology 2004 , 26 : 339- 343 http :// 差异表达基因的高通量筛选方法 李斐雪王雁玲* (中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室， 北京 1 00080 ) 摘要 cDNA 阵列 、基因芯片技术、 iAFLP(introduced amp lified fragm ent length polymorphism)、 SAGE(seri al analysis of gene expression)技术、 cDNA-AFLP、 DDRT-PCR ( diffemtial display reverse-transcription PCR) , RC4D (RFLP-coupled differential di sp lay )以及抑制消减杂交 志 技术( suppression subtractive hybridization , SSH )都是能高效鉴别两个不同细胞群差异表达基因 的方法。 现对各种方法的原理进行简要介绍，并对其优缺点进行对比， 并结合作者实验室的研究 杂 工作， 列举了 cDNA 阵列和抑制消减杂交技术在生殖生物学领域中的应用情况。 学 关键词 差异表达基因; 高通量筛选; SAGE; DDRT-PCR; S SH 物 随着人类基因组全长序列的获得，基因组研究 1.1 cDNA 阵列技术 生 重点就从基因组学转移到蛋白质组学上来，以确定 cDNA 阵列包括cDNA 阵列膜( macroarray)和 每个基因的产物并作出基因表达图谱。在组织的发 胞 cDNA 微阵列(microarray)两种。 macroaηay 技术是 育与分化过程中，基因的表达模式也在发生持续的 将变性的双链DNA 片段以机械方式点到尼龙膜上， 细 变化，这种基因表达的时空专一性决定了所有生命 现在一张 1 2 cmx18 cm 的膜上最多可以点 6000 个 过程的有序性，因此研究在正常发育和病理状况下 点，将实验组和对照组的 mRNA 通过逆转录掺入