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液相色谱溶剂效应
案例分享溶剂强度对色谱行为的影响目录进样体积对色谱行为的影响消除溶剂效应的方法样品溶剂：纯甲醇格列吡嗪含量均匀度分析方法色谱柱：Waters Nova-Pak C-18，150*3.9mm,4um进样量：20uL波长：225nm流速：1.0mL/min流动相：甲醇：PH6.0磷酸盐缓冲液=45:55峰展宽样品溶剂：甲醇：磷酸盐缓冲液=45:55样品溶剂：纯甲醇《中国药典》2010版瑞格列奈左旋异构体液相方法色谱柱：Chiral AGPTM手性柱，100*4.0mm,5um进样量：20uL波长：240nm流动相A：pH7.0磷酸盐缓冲液流动相B：乙腈梯度洗脱：样品溶剂：甲醇：磷酸盐缓冲液=60:40溶剂效应什么是溶剂效应？样品溶液的溶剂强度强于流动相溶剂强度时，可能会造成的峰展宽、峰分叉现象。溶剂效应的现象色谱图上较早洗脱的峰前沿或开叉，与此同时较晚洗脱的峰则较为正常。可能发生溶剂效应的情况保留弱，出峰时间早进样量大溶解性差异，例如《中国药典》2000年版二部盐酸环丙沙星片含量测定时，用水作稀释剂时，色谱峰面积不稳定，峰面积重新性较差。 《中国药典》2000年版二部改为用流动相为稀释剂后，峰面积重新性良好。电离状态差异，例如样品的稀释剂是pH6.8溶出介质，流动相中缓冲液是pH3.0的磷酸盐，这就可能发生保留时间不稳定及色谱峰变形的现象。溶剂强度对色谱行为的影响溶剂强度顺序反向色谱中，溶剂强度洗脱顺序为：二氯甲烷＞丙醇＞ 四氢呋喃＞ 乙醇＞ 乙腈＞ 甲醇＞ 水（最弱）。洗脱能力差异导致的色谱行为差异样品溶剂强于流动相时，样品溶剂可看成流动相的一部分，溶解于强溶剂的洗脱带，一部分样品会被强溶剂迅速洗脱出色谱柱，另一部分在洗脱过程中溶于流动相，被流动相洗脱出，这样会造成色谱峰的展宽或分叉。进样体积对色谱行为的影响当样品溶剂不同于流动相时，进样体积对色谱行为影响较为显著。当样品用流动相溶解时，进样体积对色谱行为影响较小。消除溶剂效应的方法尽量用与流动相比例相同或相近的溶剂溶解样品。对于梯度洗脱，采用初始的流动相比例。对于在流动相中溶解度小，必须用强溶剂时，减少进样体积以消除溶剂效应的影响
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