第三部分－中药指纹图谱研究关键技术及规范.pptVIP

第三部分 中药色谱指纹图谱研究程序 Research Procedure of TCM Fingerprint 主 要 内 容 中药指纹图谱建立技术规范总则； 中药材指纹图谱建立技术规范说明； 中药注射剂和中间体指纹图谱建立技术规范说明； 中药指纹图谱建立技术规范总则说明； 色谱条件选择和优化 SFDA关于中药注射剂指纹图谱的技术要求(暂行)中药注射剂色谱指纹图谱实验研究技术指南(试行) 为了加强中药注射剂的质量管理，确保中药注射剂的质量稳定、可控，中药注射剂在固定中药材品种、产地和采收期的前提下，需制定中药材、有效部位或中间体、注射剂的指纹图谱。 一、中药指纹图谱建立 技术规范总则 1 供试品收集 供试品收集是实验研究指纹图谱最初也是最关键的步骤，由于不可能对一个药材的所有样本进行实验，而且生长环境条件对药材代谢产物有影响，所以要收集有代表性的样品。收集不少于10批供试品的含义是指样本的数和量要有足够的代表性。 1．1 原料药材 在药材的化学成分与中医临床疗效之间关联尚未能阐明的现阶段，基本上是在承认其传统的功能主治及临床验证的基础上进行指纹图谱的实验研究。原料药材的指纹图谱主要是反映其自然状态的内在质量情况，研究其指纹图谱是以此作为选择原药材料投料或混批提取的依据，同时作为研究注射剂成品指纹图谱相关性的基础； 药材的“批”不是工业生产的“批”，是指相互独立的供试品，即不能将同一地点或同一渠道同一时间获得的样品分成若干份样品，以保证试验结果的代表性。为使指纹图谱能代表所表征药材的内在质量特征，不同批药材应首先包括各主产地药材，其次考虑不同其它产地和不同购买时间的不同批药材样本； 由于收集药材样品受主观和客观的条件限制，供实验的供试品严格讲均没有统计学的意义，所以样品数越多越好，l0批是最低的要求。供试品应保证其真实性，应有完整采样原始记录，内容包括：供试品来源 、采集时间(购买时间)及采集人 、基原鉴定及鉴定人 、质量评估 、供试样品的留样、贮藏和标签（留样数量应不少于实验实际用量的3倍。以保证实验结果有异议时的可追溯）。 1.2 半成品（中间体）和成品（制剂） 半成品及注射剂成品均应有10批以上的样品供实验，以保证指纹图谱的可重复性； 各批供试样品须有留样 。 2 试品溶液的制备 2．1药材供试品溶液的制备 ①取样 供试品取样应注意代表性，以保持实验室取样与实际生产应用药材一致，例如地上部分的药材，取样约o．5～lkg，分别称量茎、叶、花、果的大致比例并做记录。如果实类药材，生产时去除种子的，供试品也应除去种子，并做记录。如药材表观质量不均匀(如大小不一、肥瘦不等、粗细不匀等)，应注意供试品的取样有代表性，其后的实验中，必要时应做比较实验，以考察所含成分有无显著差异，供生产参考。 ② 称样 应按照常规要求，将选取的样品适当粉碎后混合均匀，再从中称取试验所需的数量，一般称取供试品与选取样品的比例为1：10，即如称取1g供试品，应在混合均匀的10g选取的样品中称取。因为指纹图谱需要提供量化的信息，称取供试品的精度一般要求取3位有效数字。 ③ 制备 药材指纹图谱的主要目的，一是考察药材本身的质量情况，二是以药材的指纹图谱为参比，提取物及制剂的指纹图谱与之比较，以考察制剂与原药材的相关性。 药材供试品溶液的制备，可选用适宜的溶剂和提取方法，定量操作进行，尽量使药材中的成分较多地在色谱图中反映出来，并达到较好的分离。 最终制备的供试品溶液还应能适应色谱实验的需要，如液相色谱的供试品溶液宜用色谱流动相或色谱洗脱强度较弱的溶剂； 气相色谱的供试品可采用水蒸气蒸馏法、顶空进样法或固相微萃取法，供试品如需使用溶剂，应用低极性低沸点的溶剂。 ④ 定容与放置 供试品溶液最终应用适宜的溶剂于标定容量的容器，制成标示浓度的供试品溶液(g／ml或mg／ml)； 一般要求供试品溶液尽量新鲜配制，如连续实验需要，供试品溶液应在避光、低温、密闭容器条件下短期放置，一般不超过两周，溶液不稳定的，一般不超过48小时。 2．2 半成品(提取物，中间体)供试品溶液的制备 称取不同批次的半成品(提取物)，参照“供试品溶液”的制备方法中相应的内容制备成一定量的溶液，备用。标签须注明编号或批号，应与取样的药材编号一致，或有明确的关联，以保证数据的可追溯。主要操作过程及数据应详细记录。 2．3 成品(注射剂)供试品溶液制备 液体注射剂一般可直接或稀释后作为供试品溶液，必要时也可用适宜的溶剂提取并制备成一定量的溶液。固体形式的注射剂(冻干粉针)须注意注射剂成品的附加剂有无对色谱实验干扰。如有干扰，须研究采取适宜的样品预处理方法以排除干扰(如含有氯化钠则液相色谱不可使用蒸发光散射检测器；如糖分太多，