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 基因扩增实验室常用仪器设备的使用和维护 卫生部临床检验中心 王露楠 PCR热循环仪（DNA扩增仪）? 高速( 冷冻)离心机? 漩涡振荡混旋器 恒温水浴箱/恒温金属浴 洗板机（PCR-ELISA)? 酶标仪(PCR-ELISA) 加样器? PCR热循环仪（DNA扩增仪） PCR扩增仪的原理及发展状况： PCR扩增仪原理 国内常见扩增仪简介 国内常见荧光定量PCR仪简介 PCR扩增仪的使用与保养 （2）空气驱动循环恒温装置 本系统力求降低部件的成本，用空气作为热传导媒介。装置包括机箱（外壳）、热源、冷空气源、控制器和辅助电器元件等部分。 优点：不用金属的精密加工，成本降低。整个系统没有液体流动，不用致冷液，因而安全程度高。恒温精度可达?1℃ 。 缺点：单纯靠外部空气制冷，受环境温度影响。 （3）变温金属块作恒温装置 加热方式有电热发热、半导体发热，制冷方式有半导体制冷和压缩机制冷等多种方式。 国外产品的特点是产品质量和性能较稳定。 机型：适用，建议 8*12孔德模式。 国内常见扩增仪简介 T11-II型基因扩增仪（华美生物工程公司） 温度设定范围： 室温-99?C 样品批量能力：48?0.5ml或16?1.5ml离心管 动态显示内容: 实时温度、到计数时间、到计数循环数 主要功能：整机全自动化运行，线性运动臂同时具有自动和手动功能；具有断 电恢复功能；可贮存128个用户文件。 2400型DNA扩增系统( 美国应用生物系统公司） 最大样本数：可同时扩增3*8个0.2ml PCR反应管。 温度范围：4-99.9℃ 加热冷却速度：样本实际升降温速度平均为1℃/秒。 静态样本均衡性：?0.5℃，35-100℃范围。 温度精度：35-100℃间误差小于0.75℃。 特点：所附加热盖保证防止样品蒸发，无需加石蜡油操作，满足最小5?l体积；扩增反应的要求；可储存68个PCR方法，每个方法包括PCR前处理，保温，PCR循环及PCR扩增后保温条件；断电后有自动启动功能。 PTC-200 热循环仪（MJ公司产品） 最大样本数：多样本载板可选择，其中包括扩增96个0.2ml PCR反应管。 温度范围：-5-105℃ 加热速度：样本实际升温速度为3.5℃/秒。 温度精度：孔间温度差异小于0.3℃。 特点：采用可调压力和高度的热盖，防止样品蒸发，无需加石蜡油操作；三种温控选择：模块、样本内参或电脑模拟计算。 Eppendorf梯度PCR仪 最大样本数：是唯一可同时防置0.2ml和0.5ml反应管的扩增仪，可同时扩增96个0.2ml PCR反应管和77个0.5ml反应管。 温度范围：4-99℃ 加热速度：3℃/秒。冷却速度： 2℃/秒。 温度准确性： ?0.2℃ 。 特点：循环时可对变性、退火和延伸同时设温度梯度。 PCR扩增仪的使用与保养 PCR仪应放在临床基因扩增实验室的第三区。 仪器应放置水平台上，电源电压须与仪器要求电压相一致，并连接可靠的地线。仪器远离水源、明火及腐蚀性物质。 工作室温要求：15-25 ℃，通风保证散热。 接稳压电源。尤其是半导体升温降温的设备。 每次实验时，最好能将扩增仪内的孔位全部放置样品管，若样品管少时可用空管代替，以保证实验的一致性和重复性。 PCR扩增仪的使用与保养 实验结束后应及时擦干孔位内呆能存在的水分，盖上机盖。 应定期使用电子测温仪校准温度。 水浴式扩增仪应及时补充水，以免水量过少，影响温度稳定性。 定期清洁热盖和反应孔。 国内常见荧光定量PCR仪简介 GeneAmp 5700型荧光定量PCR仪 Lightcycler 荧光定量PCR系统 ABI 7000型荧光定量PCR仪 杭州博日 Line-gene GeneAmp 5700型荧光定量PCR仪 仪器特点 外标定量，熔点曲线分析。 5700采用基于CT值之实时动态荧光定量PCR方法，结果重复性好，线性范围广，可分别用于TaqMan 荧光探针技术作定量PCR和SYBR Green荧光染料作定量PCR。 一次最多可同时分析96个样品，荧光检测波长范围530-590nm。 GeneAmp 5700型荧光定量PCR仪 影响测定结果的因素 域值设定 光路维护 加样的准确性和反应体系的均一性 反应管中是否有气泡 反应管不符合荧光检测要求或疏水性差 反应管或反应槽被荧光物质污染 反应管用记号笔做标记 Lightcycler 荧光定量PCR系统 原理和特点 可使用外标法定量，可加内对照，可做熔点曲线分析。 单一光路的三个检测点对样本同时进行三个波长的荧光检测，扩赠与检测同时进行，提供