肿瘤干细胞与肿瘤发生.pptVIP

* Points to remember – two lineages – hierarchy of increasing commitment and differentiation Recognizable late Emphasize that marrow stroma is not derived from the HSC HSC gives all macrophages and dendritic cells eg pulmonary macrophages, Kupffer cells etc * * AACRl3 (American Association for Cancer Research)2006年给出的定义是：肿瘤中具有自我更新能力并能产生异质性肿瘤细胞的细胞。 * 选取CD44 (一种与透明质酸结合的黏附分子)和CD24 (一种与P2selectin结合的黏附分子)作为分离乳腺癌肿瘤干细胞的表面标志,发现100 个表型为CD44+ CD24 - / low Lineage-的乳腺癌细胞即能在NOD /SCID小鼠中形成肿瘤,而105 个其他细胞表型的细胞却不能形成肿瘤 CD133+标志的3点理由: ( 1)可产生类似神经球的细胞球, (2)可自我更新及增殖, (3)这些细胞可分化出与原发病人一致的细胞表型 * 1、抑制癌干细胞信号通路和相关酶的活性，削弱增殖能力。 2、诱导癌干细胞分化，消耗其分裂潜能，达到抑制肿瘤发展的目的。 3、破坏为癌干细胞提供养分和保护的微环境，抑制增殖和成瘤的能力。 4、用靶向性病毒载体携带促凋亡基因诱导癌干细胞进入凋亡程序，达到清除目的。 5、抑制抗性相关蛋白的表达，增加对放疗和化疗的敏感性，提高放化疗的有效率。 人乳腺癌手术标本 制成单细胞悬液， 流式分群 分离小鼠移植乳腺癌的细胞，再次接种小鼠 不同细胞亚群移植入NAD/ SCID小鼠乳腺脂肪组织 CD44＋CD24－/low细胞接种的小鼠12w时出现明显肿瘤 未分类细胞5×104才能形成肿瘤， CD44＋CD24－/low细胞只需200个即可在小鼠乳腺中再次形成肿瘤。 表型相似 包含肿瘤组织的各种成分 乳腺癌细胞是功能上不均一的成分，仅有少量表达特征性表面标志的乳腺癌细胞能在重复移植后重建乳腺癌细胞型，且具有自我更新和多向分化能力。 肿瘤中绝大多数细胞没有能力增殖或形成肿瘤，只有肿瘤干细胞能够无限增殖，产生更多的肿瘤干细胞和缺乏肿瘤源性潜力的肿瘤细胞。 肿瘤干细胞的特点： 极强的自我复制更新能力，能够产生与上一代完全相同的子代细胞。具有极强的致瘤能力。 不断的分化能力，能够产生不同表型的肿瘤细胞，并在体内形成新的肿瘤。 具有与非致瘤细胞不同的表面标志。 在肿瘤中的所占的比例较少。 耐药性与抗凋亡特性。 四、肿瘤干细胞的分离纯化 根据特异的细胞表面标志鉴定肿瘤干细胞 采用染料Hoechst33342鉴定肿瘤干细胞 免疫磁株分离方法 采用BrdU法鉴定肿瘤干细胞 抗凋亡分选假说等 根据特异的细胞表面标志鉴定肿瘤干细胞 干细胞研究的发展很大程度上依赖细胞表面分化抗原的研究进展。因此,肿瘤干细胞分离鉴定的最重要方法就是确定细胞表面特异性标志,一般原则为结合谱系标志、正常干细胞的特异标志和正常组织特异性标志等综合评价。 目前,已经鉴定出了多种肿瘤干细胞表面标志 急性髓性白血病：CD34+ CD38- 细胞 乳腺癌： CD44+ CD24-/low Lineage-细胞 脑肿瘤：CD133+ 前列腺癌：CD44+/?2?1hi /CD133+ 恶性黑素瘤：CD20+ ABC5+ 肺腺癌：Sca-1+ CD45- Pecam- CD34+ 直结肠癌：CD133+ CD44+ CD166+ 部分肿瘤干细胞表面标志 带有CSCs表面标志抗体的磁株加入细胞悬液，特异性与肿瘤干细胞结合，在磁场作用下被吸附，非CSCs细胞则被洗脱。 免疫磁珠分离（MACS） Hoechst 33342鉴定肿瘤干细胞 研究者用Hoechst 33342对骨髓细胞染色后发现有一小部分细胞染色很浅，进一步实验发现这群细胞表达造血干细胞的表面标志Sca1+ lin-/low，这一细胞群被称为边缘细胞 (side population，SP) 已经证实SP细胞膜表面有外排泵多药耐药转运子1 (multidrug resistance transporter 1, MDR1)，能外排Hoechst染料。 干细胞高表达抗药蛋白能够将药物泵出细胞外的特性，用荧光染料Hoechest 33342对肿瘤细胞进行预染，然后用流式细胞仪进行分选。 边缘细胞 干细胞 3　采用BrdU法鉴定肿瘤干细胞 BrdU (溴脱氧尿嘧