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实时荧光定量 PCR 手册 单管 Assay 96 或 384 孔板 384 孔 TaqMan® Array Card OpenArray® 芯片 上图显示的为实时荧光定量 PCR 常用的产品形式。 实时荧光定量 PCR 基础知识 1 实验设计 2 反应板制备 3 数据分析 4 疑难解析 5 数字 PCR 6 实时荧光定量 PCR 基础知识 1 实时荧光定量 PCR 基础知识 1.1 简介 2 1.2 实时荧光定量 PCR 概述 3 1.3 实时荧光定量PCR 组分概述 4 1 1.4 实时荧光定量 PCR 分析 6 1.5 实时荧光定量 PCR 荧光检测系统 10 1.6 熔解曲线分析 14 1.7 参比荧光染料 15 1.8 污染预防 16 1.9 多重实时荧光定量 PCR 16 1.10 内部质控品和参考基因 18 1.11 实时荧光定量 PCR 仪校准 19 1 实时荧光定量 PCR 基础知识 1.1 简介 聚合酶链式反应 (PCR) 是分子生物学领域功能最强大的技 利用具有热循环功能及荧光染料筛查能力的仪器，检测反 术之一。采用 PCR 技术，利用序列特异性寡核苷酸、热 应过程中荧光的变化。实时荧光定量 PCR 仪通过绘制荧 稳定性 DNA 聚合酶和热循环，可将 DNA 或 cDNA 模板内 光与循环数曲线，生成扩增曲线，表示在整个 PCR 反应 的特异性序列拷贝或“扩增”数千至数百万倍。在传统 (终 过程中积聚的产物 ( 图 1) 。 点) PCR 中，扩增序列的检测和定量是在反应结束，即 实时荧光定量 PCR 的优点包括： 最后一