疫苗制备工艺.ppt

乙肝疫苗是乙肝病毒的特异性抗体，最初由含有高滴度的乙肝表面抗原抗体的供者血清或血浆纯化而来。 * * * * * * * （二）种毒与毒种继代 目前适应于鸡胚的种毒多系弱毒，包括自然弱毒与人工培育的弱毒两类。各种制苗用的种毒多数由国家菌毒种保藏部门或指定单位保存，保存的种毒多为冻干毒。 冻干毒种需按规定要求在鸡胚继代复壮，通常继代3代以上，经检定符合标准后方可作为生产疫苗的毒种，毒种检定内容包括无菌检验、毒价测定和其他项目的检定等。 种毒与毒种继代 鸡胚选择 接毒与收获 配苗 （三）接毒与收获 鸡胚接毒涉及接毒途径和接毒量两方面。根据不同的病毒与不同疫苗生产程序，选择最佳接种途径和接种量。 接种途径：绒毛尿囊膜接种 11~12日龄胚 尿囊腔接种 9~11日龄胚 羊膜腔接种 10~12日龄胚 卵黄囊接种 5~8日龄胚 如鸡新城疫I系和II系毒采取尿囊腔接毒，前者接种10-3稀释毒种0.1ml，后者接种10-4稀释毒种0.1ml。鸭瘟鸡胚化弱毒疫苗采用绒毛尿囊膜接种50-100倍稀释毒0.2ml。 1.接毒 接毒与收获 鸡胚选择 种毒与毒种继代 配苗 鸡胚接毒后培养增殖的时间和温度、湿度以及收获的标准与内容物依不同的病毒和不同的疫苗而异。 如鸡新城疫I系疫苗，接毒后于38.5~39?C、相对湿度60%~70%条件培养增殖，收集接毒后24~48h内死亡胚，置0~10?C冷却4~24h，收获胚液，进行无菌检验，供制备湿苗用。 也可收获胚液、胎儿及绒毛尿囊膜混合制成乳剂制备冻干苗。 鸭瘟鸡胚化弱毒疫苗，则收集接毒后48~120h内死亡的鸡胚，冷却后采取绒毛尿囊膜、尿囊液、胎儿制造冻干苗用。 2.培养收获 按规定收获的胚液、胎儿和绒毛尿囊膜乳剂经无菌检验合格后即可进行配苗。 1.湿苗 通常于鸡胚液内，按每毫升加入青霉素和链霉素500~1000U，放置0~10?C 冷暗处处理后分装。 2.冻干苗 经无菌检验后合格的胚液或胚液、胎儿、绒毛尿囊膜乳剂，按比例加入保护剂，充分混合后滤过，于滤液内按每毫升加入青、链霉素500~1000U，混合后分装冻干。 3.灭活苗 收获鸡胚液经无菌检验及毒价测定合格后，按规定比例加入平衡液，按不同病毒的灭活温度、时间进行灭活，加入相应的佐剂，制备成灭活疫苗，放置4-10?C保存。 （四）配 苗 配苗 鸡胚选择 种毒与毒种继代 接毒与收获 流程图2——病毒性禽胚疫苗制造工艺流程 受精卵 禽 胚 毒 株 种 毒 灭活病毒液 鉴定 培育 检验 检验 配制 原 料 佐 剂 配苗、乳化 灭活疫苗 含病毒尿囊液或禽胚组织 含病毒悬液 配 苗 活疫苗 保护剂 分装、冻干 分 装 灭活 原 料 种 子 扩增 收获 配制 纯化病毒悬液 接种 病毒性细胞培养疫苗制造 细胞培养疫苗有细胞培养灭活疫苗和细胞培养活疫苗两类，前者多以强毒毒株培养增殖制造，后者则用弱毒毒株增殖生产，两者的制造程序既有相同之处，又有区别。由于病毒不同与疫苗性质不同，所采用的细胞及细胞培养方法也有所不同 接毒与收获 种毒与毒种继代 配苗 细胞制备 （一）种毒与毒种继代 用于制苗用的种毒应经毒力、最小免疫量、安全性、无菌检定合格，通常为冻干品，由国家指定的苗毒种保藏部门检定分发。 领取的种毒应按规定在细胞继代培养适应后用作毒种，制苗用毒种应按规定控制在一定代数以内，或为湿毒毒种，或为冻干毒种。 制造疫苗用的细胞大体为原代细胞和传代细胞两类，根据病毒种类、疫苗性质与工艺流程选择不同的细胞。 选择的依据包括：病毒的适应性高、毒价高、细胞来源方便、制备简单、生命力强。 如猪瘟兔化弱毒牛睾丸细胞疫苗采用犊牛睾丸原代细胞；脊髓灰质炎活疫苗选择vero细胞；狂犬病弱毒细胞适应疫苗采取BHK21细胞增殖病毒等。 （三）细胞制备 接毒与收获 种毒与毒种继代 配苗 细胞制备 培养细胞和增殖病毒用的营养液又称培养液，通常分为细胞培养用的生长液和病毒增殖用的维持液，两者不同的之处通常只是生长液内含有5%-10%的血清；维持液血清浓度为2%-5%。 不同细胞所需的营养成分和生长条件