异硫氰酸荧光素2牛血清白蛋白标记物的化学发光反应.PDF

( ) 第 30 卷 分析化学 FENXI HUAXUE 　研究简报 第 4 期 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 2002 年 4 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 447～449 异硫氰酸荧光素牛血清白蛋白标记物的化学发光反应 1 2 2 黄春保 　慈云祥 　常文保 1 ( ) 2 ( ) 黄冈师范学院化学系 ,黄州 438000 　　 北京大学化学与分子工程学院 ,北京 100871 摘 　要 　采用反相流动注射法 ,系统地研究了碱性介质中和阳离子在表面活性剂 CTMAB 存在下 ,NaClO 氧化 异硫氰酸荧光素牛血清白蛋白标记物的化学发光行为和化学发光反应的条件 ,提出了反相流动注射化学发 光测定牛血清白蛋白的新方法。该法测定牛血清白蛋白线性范围为 0. 08～16 mgL ;检出限为 0. 032 mgL 。讨 论了蛋白质标记物化学发光增强作用的原因。 关键词 　异硫氰酸荧光素 ,牛血清白蛋白 ,化学发光反应 ,流动注射法 1 　引　　言 蛋白质测定在临床医学和生命科学研究中具有重要意义 。这方面的研究引起了人们的广泛重视。 近年来 ,常见蛋白质测定方法的报道 ,其中大多是利用蛋白质与生色探针的结合作用 ,生成有色复合物 后以分光光度法测定1 ～3 ,少数是将蛋白质用卟吩、四环素等荧光探针标记后 ,用荧光光度法测定4 ,5 , 也见有蛋白质电分析方法的报道6 。这些方法在临床检测和生化分析中具有一定的应用价值。 ( ) 研究发现 ,在碱性条件下 ,选用某些氧化剂氧化异硫氰酸荧光素 FITC ,能产生化学发光 ,但强度很 弱。若在碱性介质中 ,将异硫氰酸荧光素标记到蛋白质分子上 ,生成的蛋白质标记物则更易于氧化 ,不 仅化学发光能力极大增强 ,而且发光强度与蛋白质的含量呈良好的线性关系。本文采用反相流动注射 ( ) 方法 ,研究了碱性介质中 ,次氯酸钠氧化异硫氰酸荧光素牛血清白蛋白 BSA 标记物的化学发光行为、 反应条件和阳离子表面活性剂的增敏作用 ,提出了反相流动注射化学发光测定牛血清白蛋白的新方法。 体系的发光强度与BSA 的含量在0. 08～16 mgL 范围内呈良好的线性关系 ;检测限为 0. 032 mgL 。由于 采用反相流动注射进样方式 ,消除了样品背景干扰 ,故方法的灵敏度高 ,且稳定性好。 2 　实验部分 2. 1 　仪器与试剂 ( ) ( ) GD1 型微光测量仪 西北有色地质研究所 ;LP1 型蠕动泵 北京东方仪器设备公司 ; 自动平衡记 ( ) ( ) 录仪 上海大华仪表厂 ;821 型pH 计 中山大学 。 ( ) (