(蓝白斑筛选)lACZβ半乳糖苷酶.ppt

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2019-02-09 发布于江苏
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(蓝白斑筛选)lACZβ半乳糖苷酶.ppt

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* * 阳性克隆的快速检测一、实验目的学习蓝白斑筛选试验中阳性克隆的快速检测方法掌握蓝白斑筛选的原理和方法二、蓝白斑筛选的原理重组质粒转化细菌后，蓝白斑筛选往往是基于抗生素筛选基础上的第二次筛选。一般培养转化细菌的培养基中都要加入一定浓度的适宜抗生素，只有含有质粒载体的细菌才可以生长形成菌落，即抗生素完成对细菌是否含有质粒载体进行了初步筛选。质粒载体上存在的LacZ基因片段当被外源DNA片段插入时，会产生白色的克隆，不含插入片段的质粒进入宿主细胞生成蓝色菌落。这就是蓝白斑筛选，即a-互补显色反应 lacZ β-半乳糖苷酶分解乳糖 i P O 调控蛋白P 大肠杆菌的β-半乳糖苷酶基因lacZ系统 a-互补显色反应（蓝白斑筛选） lacZ - β-半乳糖苷酶- 分解乳糖 i P O 调控蛋白P α-肽段分解X-gal 产物呈现蓝色诱导剂IPTG β-半乳糖苷酶基因lacZ突变体M15 三、实验材料、器具及药品　　实验器具　　1.5ml Ep管，离心管架，微量取液器，台式高速离心机，恒温振荡摇床，电泳仪，紫外透射检测仪。实验材料　　LB固体培养基上生长的蓝白菌斑实验药品 1. 溶液Ⅱ 0.4mol/L NaOH 2%SDS 临用前1:1混合贮存液即为II液. 2. 分离液酚/氯仿/异戊醇＝25:24:1 3. 1%琼脂糖凝胶 *