导致阿米卡星双圈耐药肠杆菌科细菌耐药性研究-统计研究.PDF

·１０１２· 检验医学２０１３年１１月第２８卷第１１期　ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ２０１３，Ｖｏｌ２８．Ｎｏ１１． 文章编号：１６７３８６４０（２０１３）１１１０１２０４　　中图分类号：Ｒ４４６．５　　文献标志码：Ａ　　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３８６４０．２０１３．１１．０１１ 导致阿米卡星双圈耐药肠杆菌科细菌耐药性研究 周万青，　沈　瀚，　宁明哲，　张之烽，　徐学静，　朱　宏，　曹小利，　张　葵 （南京大学医学院附属鼓楼医院检验科，江苏 南京２１０００８） 　　摘要：目的　探讨临床分离的纸片扩散法药物敏感性试验对阿米卡星（ＡＭＫ）呈双圈耐药的肠杆菌科细菌 相关携带基因及药物诱导对耐药基因ｍＲＮＡ表达量的影响。方法　收集纸片扩散法药物敏感性试验对ＡＭＫ呈 双圈耐药的大肠埃希菌（编号Ｅｃｏ８５）和肺炎克雷伯菌（编号Ｋｐｎ１１０）各１株；纸片诱导法探讨耐药表型的改变； 聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增氨基糖苷类修饰酶基因、整合子及其可变区以及１６ＳｒＲＮＡ甲基化酶基因；逆转录ＰＣＲ 分析ａｒｍＡ基因在ＡＭＫ诱导前后菌株中的表达情况；接合试验探讨耐药基因的可传递性。结果　Ｅｃｏ８５和 Ｋｐｎ１１０分别在第１０代和第１６代诱导后转变为双圈消失；２株菌均扩增出 类整合子基因，可变区分别携带 Ⅰ ａａｄＡ５ｄｆｒａ１７和ａａｄＡ２ｄｆｒＡ１２基因盒，未扩增出 和 类整合子基因；Ｅｃｏ８５扩增出ａａｃ（６） 基因，而Ｋｐｎ１１０ Ⅱ Ⅲ Ⅰ 扩增出ａｎｔ（３″）基因；Ｅｃｏ８５和Ｋｐｎ１１０均扩增出ａｒｍＡ基因，基因测序未发现突变，未检出ｒｍｔＢ基因；经ＡＭＫ Ⅰ 诱导后菌株ａｒｍＡ基因ｍＲＮＡ表达量明显上升；接合试验未获成功。结论　大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对ＡＭＫ 呈双圈耐药可能与１６ＳｒＲＮＡ甲基化酶ａｒｍＡ基因的诱导表达相关。 关键词：双圈耐药；诱导；ａｒｍＡ基因；阿米卡星；肠杆菌科细菌；逆转录聚合酶链反应 　　ＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅｄｏｕｂｌｅｃｉｒｃｌｅｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏａｍｉｋａｃｉｎｉｎＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ　ＺＨＯＵＷａｎｑｉｎｇ，ＳＨＥＮＨａｎ， ＮＩＮＧＭｉｎｇｚｈｅ，ＺＨＡＮＧＺｈｉｆｅｎｇ，ＸＵＸｕｅｊｉｎｇ，ＺＨＵＨｏｎｇ，ＣＡＯＸｉａｏｌｉ，ＺＨＡＮＧＫｕｉ．　（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＤｒｕｍＴｏｗｅｒＨｏｓｐｉｔａｌ，ＮａｎｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＪｉａｎｇｓｕＮａｎｊｉｎｇ２１０００８，Ｃｈｉｎａ） 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｄｏｕｂｌｅｃｉｒｃｌｅｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｔｏａｍｉｋａｃｉｎ（ＡＭＫ）ｉｎＥｎｔｅｒｏ ｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅｂｙｄｉｓｋｄｉｆｆｕｓｉｏｎｍｅｔｈｏｄａｎｄｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｍＲＮＡ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　 ＯｎｅｓｔｒａｉｎｏｆＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ（Ｅｃｏ８５）ａｎｄｏｎｅｓｔｒａｉｎｏｆＫｌｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（Ｋｐｎ１１０）ｗｈｉｃｈｓｈｏｗｅｄｄｏｕｂｌｅｃｉｒｃｌｅ ｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏＡＭＫｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄ，ａｎｄｔｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｐｈｅｎｏｔｙｐｅｃｈａｎｇｅｗａｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙｄｉｓｋｄｉｆｆｕｓｉｏｎｍｅｔｈｏｄ． Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ（ＰＣＲ）ｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｆｏｒａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｇｅｎｅｓ，ｉｎｔｅｇｒｏｎｓａｎｄ１６ＳｒＲＮＡ ｍｅｔｈｙｌａｓｅｇｅｎｅ．ＴｈｅａｒｍＡｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓａｍｏｎｇｓｔｒａｉｎｓｉｎｄｕｃｅｄａｎｄｎｏｎｉｎｄｕｃｅｄｂｙＡ