1.高级光学显微镜及其使用.ppt

* 高级光学显微镜的 结构及其使用 1. 了解高级光学显微镜的原理、结构和各部件性能。 2. 掌握低倍镜、高倍镜的正确使用方法，熟悉油镜 的使用方法。 3. 熟悉光镜下各种不同类型细胞的基本形态与结构 实验目的 实验用品 Nikon显微镜，Olympus多功能显微镜，擦镜纸，香柏油，标本片 实验内容 一、显微镜的成像原理 二、显微镜的基本结构 三、显微镜的主要性能参数 四、显微镜的使用方法 一、显微镜的成像原理 显微镜是根据透镜成像的原理，对微小物体进行放大的，当被检物体AB放在物镜前方的1-2倍焦距之间，光线通过物镜在镜筒中形成一个倒立的放大的实像A1B1，这个实像恰好位于目镜的焦平面之内，通过目镜后形成一个放大的倒立的虚像A2B2。通过调教装置使A2B2落在人眼睛的明视距离（250mm）处，使眼睛所看到的物体最清晰，即倒立虚像A2B2是在人眼球晶状体的两倍焦距之外，通过眼球后，在视网膜形成一个正立实像A3B3。 图1 光学显微镜的放大原理和光路图 二、显微镜的基本结构 光学显微镜由三部分组成：机械部分、照明部分和光学部分。 机械部分包括：镜筒、物镜转换器、镜臂镜座、 载物台、调焦螺旋。 照明部分包括显微镜的光源。 光学部分包括物镜、目镜、聚光器和光阑。 图2 Olympus显微镜的结构图 （一）显微镜的照明部分 1.照明光源 光源可以是自然光源，也可以是电光源。利用自然光源，只需要反光镜即可。电光源常见的多为溴钨灯，体积较小，钨丝似点状，灯壳为石英玻璃。电压为12V，色光为连续光谱，色温一般在3200-3400K之间。装卸灯泡时，不能直接用手触摸灯壳，以免污染。 2.科勒照明 柯勒照明法是目前用于显微镜观察和显微摄影中最为理想的照明方法。 柯勒照明的基本原理是：光源的灯丝经光源聚光器及可变视场光圈后，第一次落在聚光器孔径光阑的平面处（灯丝像），而后，聚光器又将光源的灯丝像传入物镜，在物镜的后焦面平面处形成第二次灯丝像，因此，在被检物体的平面处没有灯丝像的形成，故在视野内看不到灯丝像。 图3 光学显微镜的照明方法 a 临界照明法 b 柯勒照明 该照明法的主要优点表现在：第一是照明均匀，因为在标本平面上成像的是视场光阑而不是灯丝；第二是通过调节视场光阑的大小和位置可以控制标本平面上照明区的大小和位置，当只需要观察标本的一部分时，通过缩小视场光阑，就可以减少照明区域，使标本的其他部分不受热。 （二）显微镜的光学部分 1. 物镜 根据前透镜与被检标本盖片之间的介质情况，可将其分为： （1）干燥系(dry system)物镜 以空气（?=1）为介质 （2）水浸系(water immersion)物镜 以水（?=1.333）为介质 W （3）油浸系(oil immersion)物镜 以油为介质 oil，oel，imm等标志 根据放大倍率的高低，可将其分为： （1）极低倍物镜 0.7×，0.5× （2）低倍物镜 1×～6×，NA在0.04～0.15之间 （3）中倍物镜 6×～25×，NA在0.15～0.40之间 （4）高倍物镜 25×～63×，NA在0.35～0.95之间 （5）油浸物镜 90×～100×，NA在1.25～1.4之间 根据物镜像差校正的程度，又可以分为： （1）消色差物镜(achromatic) 能校正红蓝二光的位置色差和黄绿光的球差，Ach。 （2）复消色差物镜(apochromatic objective) 能校正红绿蓝三色光的位置色差，同时能较好地校正红蓝二光的球差，Apo。 （3）半消色差物镜(semi apochromatic objective)，又叫萤石物镜(fluorite objective) 介于上面二者之间，FL。 （4）平场物镜(plan objective) 用来校正像场弯曲，可以和上边三种物镜配合形成PL， PL·FL，PL·APO （1）物镜的种类 APO(复消色差物镜)，FL(萤石物镜或半复消色差物镜)，PL(平场物镜)，PL·FL(平场萤石物镜)和PL·APO(平场复消色差物镜)。 （2）放大倍数 用数字表示，如4、10、20、40和100等。 （3）数值孔径 物镜的数值孔径，通常简写为N.A.,常和放大倍数写在一起,如10/0.25 ,40/0.65等。 （4）标准机械筒长(160mm) （5）需用盖片情况 常与机械筒长写在一起，如：160/0.17, 160/0, 160/