流式细胞仪AccuriC6操作规程.PDF

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流式细胞仪AccuriC6操作规程

流式细胞仪Accuri C6 一、启动Accuri C6 仪器 ① 依次开仪器电源、电脑显示器及主机电源 ② 5~10 分钟后,双击电脑桌面“CFlow Plus ”图标,进入仪器控制软件界 面。软件界面信号灯指示为黄色,显示仪器与电脑没有连接好;软件界面 信号灯指示为绿色,显示仪器与电脑已连接好 ③ 检查仪器旁边四个液体容器,清空“Waste ”桶中的废液,检查“Sheath”、 “Cleanning fluid ”、“Decontamination ”三个桶中液体量是否满足实验要 求,若存放时间超过1 个月,则需要进行更换。其中“Sheath”为超纯去 离子水,“Cleanning fluid ”有效氯离子为1%的次氯酸钠,“Decontamination ” 为细菌消毒液,1295µl 杀菌液原液用超纯水定容250ml ④ 载物台上放置空管,点击软件界面Instrument/Run backflush cycle ,可以看 见少许液体从进样针中流出来,作用为反冲,清除进样针中的残留物 ⑤ 在软件96 孔板界面中任选1 孔,载物台上放置1 管去离子水, ⑥ 选择运行速度为“High ”,运行时间设置为10 分钟,点击“Run ”按钮运 行10 分钟自动停止。该步骤的作用是:激光器预热,清晰管路 ⑦ 该孔收集数据后变为蓝色,鼠标选中该孔,点击“Delete Sample Data ”, 删除孔内数据,启动步骤完成,即可开始检测样品 二、Accuri C6 样品检测 ① 将样品放置在载物台上,在软件96 孔界面选择样品的位置,并命名 ② 设置检测停止条件。(1)无限制检测Run unlimited ,手动点击停止;(2 ) 收集多少个细胞后停止,在events 框中填写;(3 )收集多长时间停止, 在min 和sec 框中填写;(4 )收集多少体积停止,在µl 框中填写 ③ 在Fluidics 框设定进样速度,可选择慢速、中速和快速,或者在Custom 框中手动设置进样速度 ④ “Set Threshold”设定阈值,需要根据实验设定合适的阈值,阈值设置太 低,背景荧光对目标细胞的荧光信号产生较大的干扰,阈值设置太高, 无法有效检测目标细胞 ⑤ “Set Color Compensation”设定颜色补偿,一般在数据处理分析过程中 进行 ⑥ 点击“Run ”按钮,开始样品检测 三、样品检测过程中注意事项: ① 样品之间无需用去离子水冲洗,当完成所有样品检测时,必须运行 Instrument/Cleanning fluid cycle 清晰程序。检测结束后,在载物台上放置 1ml 有效氯离子为1%的次氯酸钠,点击清晰程序开始清晰 ② 样品检测过程中发现每秒细胞数量减少,表明管路发生堵塞,需要运行 Backfush ,再用去离子水清洗2 分钟 ③ 每个样品测定完,需及时保存测定数据 四、关闭Accuri C6 (1)在任意1 个打开的文件下,在96 孔界面中任选1 空白孔,载物台上放 置0.1%次氯酸钠溶液,高速运行2 分钟 (2)在96 孔界面中任选1 空白孔,载物台换上去离子水,高速运行2 分钟, 多余的去离子水一直留在载物台上 (3 )按一下仪器前方电源按钮关闭仪器,信号灯由绿色变为黄色,显示仪 器正在关闭,关闭过程中大约需要10 分钟 (4 )关闭软件,不用保存清洗步骤所产生的数据,关闭电脑及显示器。注 意:C6 和电脑控制软件相对独立,关闭C6 和退出控制软件不讲究先 后顺序 五、Accuri C6 的日常维护 (管路清洗) (1)开仪器、电脑显示器、主机及软件,仪器稳定后,清洗上样针:在上样 针下面放一张吸水纸或者空管子,用来接滴下的水滴,运行Instrument/Run Black flush cycle ,清除上样针里面的残留物 (2 )运行去碎片化循环(Unclog ):在上样

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