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动物细胞培养在科研、生产中的应用 一、动物细胞培养在科研中的应用 POLD1基因表达受到抑制后对MCF-7细胞的生长及周期的影响 Trizol提取MCF-7细胞总RNA 反义POLD1表达重组质粒pXJ41-as-POLD1的构建及鉴定 细胞转染及稳定表达细胞株的筛选 细胞生长曲线实验 血清依赖性实验 单细胞克隆形成实验 软琼脂集落形成实验 胸腺嘧啶核苷（TdR）双阻断法同步化MCF-7细胞 流式细胞光度术（FCM）进行细胞周期分析 Western blot鉴定转染细胞中特异性蛋白的表达 论文题目： 中心体蛋白centrin在人胚胃上皮细胞GES1 的细胞增殖和癌化中的作用 答辩人：陈 娴 指导导师：王永潮 教授 实验方法 构建反义重组质粒 转染细胞并筛选细胞株 半定量RT-PCR（semi RT-PCR） 细胞生长活性测定 细胞生长曲线测定 血清依赖性实验 平板集落形成率测定 软琼脂集落形成比较 流式细胞光度术（FCM）分析细胞周期 细胞间接免疫荧光实验（IEF） 免疫印迹实验（western blot） 细胞转染及稳定表达细胞株的筛选 GES1细胞G418筛选浓度的选择 （300ug/ml） 稳定表达细胞株的筛选 GAC1 GAC3 细胞生长曲线的测定 返回 血清依赖性试验结果 平板集落形成率的比较 平板集落形成率的比较 返回 软琼脂集落形成比较 GES1 BG823 GAC1 GAC3 返回 GES1表现的正常细胞分裂周期 GAC3分裂期细胞 返回 一个新的细胞周期相关蛋白ICF45 基因克隆及其功能研究 Clone and characterization of a novel cytoplasm protein ICF45, involved in cell cycle regulation 答辩人： 郭德良 导 师： 何大澄 教授 ICF45 Research Full-length cDNA 克隆及其生物信息学分析 ICF45 mRNA 在不同组织中表达分析 ICF45蛋白表达分析 ICF45 亚细胞定位研究 利用RNAi 研究ICF45细胞内功能 第五部分 利用RNAi 研究ICF45 细胞内功能 1. 稳定沉默ICF45基因表达的克隆细胞株建立 2． 细胞形态和核变化 观察 3. 细胞生长和增殖能力 4. 细胞周期和DNA含量变化 5． 细胞凋亡率 6． p53表达 7. Centrosome and spindle 8. 微丝形态变化 二、动物细胞培养在生产中的应用 中国预防医学科学院病毒所2019年遗传免疫室工作年会报告题目 序号 题 目 时间（分） 报告人 15 高效表达乙肝表面抗原转基因细胞系的构建及细胞系的 10 杨芙蓉 生长特性的研究 张陵林 16 篮式生物反应器灌流培养工艺的研究 10 宗 芳
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