中药对视神经损伤-文档资料.ppt

中药对视神经损伤修复的影响 项目简介 实验背景 目前的治疗手段 实验目的 研究内容和拟解决的问题 实验步骤 实验结果预测 实验意义 本实验创新之处 实验背景 自1982年已有报道视神经切断的再生实验，将青蛙的视神经切断，3个月内，视神经再生，视力恢复。以及1985年Aguago动物实验和1987年Vidal等动物实验均证实视神经具有再生功能。可是由于视神经损伤的病理过程复杂，再生过程受到诸多因素的影响。近10年已从起解剖、生理、生物化学等方面进行研究，并已经得到一些明确的结论。 有实验表明，复明中药可能通过其扩张血管增血流动功能，促进组织的新陈代谢，从而改善是神经组织的内环境，加强神经细胞的合成，促进视神经的再生。 通过测定某些药物对视神经损伤修复的作用，筛选出来的具有促进作用的药物。并且通过这个实验有助于了解中药的作用机制，为中药的临床应用提供现代理论依据。 视神经损伤修复的重要性 视神经损伤导致： 1、视力下降甚至是失明 2、直接光反射消失、间接光反射正常现象 3、双眼的视力受损和视野缺损症状 所以，视神经损伤有效的治疗就显得急需和迫切。 目前主要治疗手段 早期药物治疗： 脱水剂、糖皮质激素、血管扩张剂、钙离子通道阻滞剂以及维生素C、E、B等药物，以及维生素B1、ATP以及辅酶A，地巴唑、菸酸、维生素E、复方丹参、维脑路通等等。 实验目的 探究并测定哪些中药单体对视神经损伤具有修复作用，以及筛选出对视神经节细胞再生最具促进作用的新药。为正处在视神经损伤造成的视力下降，甚至丧失视力的患者带来福音。 研究内容和拟解决的问题 研究内容： 1、用视神经横断伤法将老鼠的视神经自视交叉前任一部位切断，以至所有视网膜神经节细胞（RGC）轴突完全断离。 2、分别给各组老鼠注射几种不同的中药，分3—5期进行观察记录各组老鼠的视神经节细胞的再生情况，以及视力恢复情况。 拟解决的问题 1、明确视交叉的解剖位置，为断离视神经节细胞轴突，制备动物模型提供解剖学依据。 2、熟悉各种直接或间接检测老鼠视力情况的科学方法。 1、动物分组 1、选取条件相似的小鼠设为对照组及实验组1、2、3 指标 组 视神经纤维积光密度 视神经髓鞘积光密度 视神经胶质细胞 对照组 实验组1 实验组2 实验组3 2、视神经损伤鼠模型的建立 视神经横断伤法建立视神经损伤动物模型 概念： 此法是将视神经沿眶上切迹切断，使视网膜神经节细胞（RGC）和中枢神经系统完全断离。 优点： 各实验动物致伤量一致，观察再生时不会受残留未受损的轴突影响，并且试验具有可重复性，各组间可进行对照，期间，药物可进行平行筛选。 视神经损伤鼠模型的建立 结扎剪断上直肌：于结膜穹窿部9~3点钟位剪开结膜，向上分离暴露上直肌，用5-缝线结扎上直肌肌止端，剪断上直肌。 暴露视神经：用眼脸拉钩牵拉上脸，向框外和下方牵拉上直肌残端的缝线，同时用斜视钩伸向球后，向框外球下方轻拉眼球，以暴露视神经。 横断视神经：用手术剪将暴露出的视神经剪断 术后处理：缝合结膜，同时注射庆大霉1千U，涂金霉素眼膏。 术前准备：术眼结膜囊冲洗，手术部位剃毛消毒铺巾。 3、注入各种中药 实验组在角膜缘后睫状体部位用性注射器向眼球内垂直刺入，注入中药，同时前房水放出等量的房水，以保证眼球内压不变，对照组不做处理注入放回笼中。 分别于3、7、14天，取实验鼠1、2、3组的小鼠的视网膜作免疫荧光，以及取出视神经，送至病理科检查， 染色检查以下指标：视神经纤维积光密度、视神经髓鞘积光密度、视神经胶质细胞。 4、记录在案，并进行整理、统计、分析各指标的检测结果 分别比较视神经纤维积光密度、视神经髓鞘积光密度、视神经胶质细胞三项指标。 视神经损伤后应有视神经纤维减少、视神经纤维脱髓鞘和神经胶质细胞增生等病理改变。 通过比较三项指标可以确认哪种中药对视神经的再生影响最大。 5．年度研究计划和预期进展 2019年11月—2019年1月：查文献、资料，预实验。 2019年2月—2019年4月： 1、制备动物模型 2、使用免疫荧光法检测三种中药 3、分析数据并记录在案 2019年5月—2019年6月： 1、制备动物模型 2、使用F-VEP检测三种中药 3、分析数据并记录在案 2019年7月—2019年8月 1、制备动物模型 2、使用病理形态学检查三种中药 3、分析数据并记录在案 2019年9月—2019年11月： 补充整理资料，撰写论文，提交总结报告，请专家组验收。（上述安排可根据实际情况适当调整和总体安排） 实验结果预测