人参三七川芎提取物延缓内皮细胞复制性衰老的机制研究-中国中药杂志.PDF

第３４卷第１２期 Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ　１２ ２００９年６月 　　　　　 　 　 　 　 　　　　　 　 　 　 　　 Ｊｕｎｅ，２００９ 人参三七川芎提取物延缓内皮细胞复制性衰老 的机制研究 １ １ ２ ３ １ 杨静 ，雷燕 ，崔巍 ，方素萍 ，陈可冀 （１．中国中医科学院 西苑医院，北京 １０００９１； ２．北京中医药大学 东直门医院，北京 １００７００； ３．中国中医科学院广安门医院，北京 １０００５３） ［摘要］　目的：探讨人参三七川芎提取物对内皮细胞复制性衰老（ｈｕｍａｎｕｍｂｉｌｉｃａｌｖｅｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ，ＨＵＶＥＣｓ）的影 响。方法：体外培养的ＨＵＶＥＣ２Ｃ传代至第８代，造成内皮细胞复制性衰老模型。细胞分为４组，８代衰老模型组、维生素Ｅ －１ －１ （ＶｉｔＥ）组（５０ｍｇ·Ｌ ）、中药高、低 （５０，２０ｍｇ·Ｌ ）剂量组，采用衰老相关 半乳糖苷酶（ＳＡｇａｌ）染色法观察细胞衰老 β β 改变，流式细胞仪分析细胞周期，激光共聚焦显微镜观察细胞内活性氧（ＲＯＳ）含量，硝酸还原酶法检测培养液一氧化氮（ＮＯ） 和抗超氧阴离子水平，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测各组细胞Ａｎｇ １型和２型受体（ＡＴＲ和ＡＴＲ），ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ氧化酶ｐ４７ｐｈｏｘ的 Ⅱ １ ２ 蛋白表达。结果：８代衰老模型组 ｇａｌ染色阳性细胞数明显增多，细胞停滞在Ｇ／Ｇ期，激光共聚焦显微镜下ＲＯＳ荧光强度 β ０ １ 明显增强，培养液中抗超氧阴离子、ＮＯ含量减少，ｐ４７ｐｈｏｘ，ＡＴＲ，ＡＴＲ蛋白表达上调。给予高、低剂量中药处理后，可明显改 １ ２ 善细胞的衰老状态，ｇａｌ染色阳性细胞数减少，Ｇ／Ｇ期细胞减少，Ｇ／Ｍ期细胞增加，ＲＯＳ荧光强度减弱，抗超氧阴离子、ＮＯ β ０ １ ２ 含量较８代衰老模型组增加，ｐ４７ｐｈｏｘ，ＡＴＲ，ＡＴＲ蛋白表达下调，差异均有统计学意义（均Ｐ＜００５）。结论：人参三七川芎提 １ ２ 取物能够延缓内皮细胞复制性衰老，通过活性氧途径下调ＮＡＤＰＨ氧化酶ｐ４７ｐｈｏｘ的表达，最终使ＲＯＳ产生减少；同时，中药 提取物还能降低衰老内皮细胞ＡＴＲ，ＡＴＲ的表达，改善内皮功能，这可能是益气活血中药延缓内皮细胞衰老的主要原因之一。 １ ２ ［关键词］　人参三七川芎提取物；ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ氧化酶；细胞复制性衰老；ＲＯＳ 　　我国已进入老龄化社会，因而研究和防治与增 镇；三七Ｐａｎａｘｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ，产自云南；川芎Ｌｉｇｕｓｔｉｃ 龄有关的疾病，有效延缓衰老的进程已成为社会需 ｕｍｃｈｕａｎｘｉｏｎｇ，产自四川，经中国中医科学院中药研 求。研究发现，衰老是造成心血管疾病相关发病率 究所黄璐琦研究员鉴定均符合《中国药典》２００５年 和死亡率增高的主要独立危险因素之一［１］，并且 版标准。人参三七川芎提取物为醇提物，由中国中 心血管疾病中存在明显的血管老化表现，如内皮细 医科学院中药研究所提供（实验用药加入３倍７０％ 胞功能的紊乱和衰老。人参三七川芎属于中药益气 乙醇