琥珀磷酸酶的竞争性抑制.ppt

琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制 * ppt课件 CONTENTS 实验目的 实验原理 实验器材与试剂 实验步骤 * ppt课件 1 ONE 实验目的 2 TWO 3 THREE 学习动物的处死与组织匀浆的方法 学习离心机的使用方法 理解酶的竞争性抑制原理 * ppt课件 实验原理 实 验 原 理 竞争性抑制是指分子结构与底物相似的抑制剂可与底物竞争性结合酶的活性中心，抑制酶的活性，其抑制程度取决于抑制剂与酶的亲和力及与底物的相对比例。 草酸与琥珀酸分子结构相似，是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂。琥珀酸脱氢酶催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸。体内琥珀酸脱下的2H经电子传递链传递，最后与氧结合生成水，并释放出能量。在体外则可用甲烯蓝(蓝色)作为受氢体，甲烯蓝接受琥珀酸脱下的2H而被还原为甲烯白(无色)。在甲烯蓝含量一定的条件下，蓝色消退的快慢程度可指示琥珀酸脱氢酶的活性，因此，可依据蓝色消退的时间来判断该酶活力被抑制的程度。 * ppt课件 实验原理 特点： 1. 抑制剂与底物结构相似 2. 两者都与酶的活性中心结合,排斥性抑制 3.抑制程度取决于抑制剂与酶的相对亲和力和与底物浓度的相对比例 4. 增加底物浓度可减低或解除抑制作用 * ppt课件 试 剂 PH7.4 0.25% 0.5% 0.01% 实验器材与试剂 PH7.4磷酸缓冲液（PBS） 0.25%琥珀酸钠溶液 0.5%草酸钠溶液 0.9% 0.9%生理盐水 0.01%甲烯蓝溶液 * ppt课件 WPS答辩专题 1.肝糜液的制备：取小白鼠1只，颈椎脱臼法处死。剖腹将肝脏全部取出，置于研钵中，用生理盐水洗净肝脏中的血液。用剪刀剪碎肝脏，充分研碎至糊状，然后分批加入磷酸缓冲液，边加边磨，共加人7?mL。搅匀后倒入圆底离心管中，离心约3?min(3?000?r/min) 。将上清液倒入一支试管中备用，此即为含有琥珀酸脱氢酶的肝糜液。 * ppt课件 WPS答辩专题 2. 另取中试管五支，标号，按表5-5操作 3. 摇匀，静置于37它的水浴中(此后再勿摇动!)，注意观察各管的颜色变化。记录各管 4. 震荡退色的反应液，观察实验现象并分析产生该现象的原因。 * ppt课件 注意事项 1. 实验成败的关键是肝糜液制备的质量。肝脏一定要充分研磨至糊状，以使琥珀酸脱氢酶尽量释放到溶液里。 2. 离心时注意离心管一定要精确平衡，并将质量相等的离心管对称放置。 3. 离心结束后拿取离心管时动作要轻柔，不要振荡离心管，以免肝糜液重新变混凝浊。 * ppt课件 谢谢聆听 答辩人：xxxx 导 师：xxxx * ppt课件