课件：金黄色葡萄球菌检验.ppt

* * 金黄色葡萄球菌检验 概况 葡萄球菌属微球菌科，本菌有19个菌种，从人体上可检出12个种。 葡萄球菌属主要与皮肤腺体和温血动物的粘膜相关系，有些种是人及动物的条件致病菌。 金黄色葡萄球菌对人类有致病性，通常被称为病原性球菌。金黄色葡萄球菌可引起化脓性炎症，又称为化脓性球菌。 金黄色葡萄球菌的生物学特性 形态与染色： 金黄色葡萄球菌的典型形态呈球形，直径0.4～1.2μm，大小不一，平均直径约为0.8μm。 革兰氏染色阳性，呈葡萄串状排列。无鞭毛、无芽胞。在陈旧培养物中，衰老的菌体常转为革兰氏阴性。 培养特性： 易培养，对营养要求不高，在普通培养基中生长良好。 需氧或兼性厌氧。 最适生长温度37℃，最适生长pH 7.4。耐盐性强，在含10～15%的氯化钠培养基中仍能生长，可用于筛选菌种。 在普通营养琼脂平板上培养18～24ｈ，可形成圆形、表面光滑、不透明的菌落。可产生金黄色色素，色素为脂溶性，不溶于水，故色素只局限于菌落内，不渗至培养中。 在血平板上可形成明显透明的溶血环。为β型溶血。 可产生卵磷脂，在卵黄高盐培养基上形成周围有白色沉淀环的菌落。 大多数菌株分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红试验、 VP试验多为阳性，不产生靛基质。触酶阳性。 金黄色葡萄球菌的酶 金黄色葡萄球菌可产生血浆凝固酶和耐热DNA酶。这两种酶均与金黄色葡萄球菌的致病性有关。 血浆凝固酶：与金黄色葡萄球菌的致病力密切相关。一般认为，血浆凝固阳性的金黄色葡萄球菌菌株有致病力。否则为无力的菌株。血浆凝固酶对热稳定，能抵抗60℃30min甚至100℃30min后，仍能保存大部分活性。 耐热DNA酶作为除血浆凝固酶外鉴定金黄色葡萄球菌致病力的指标之一。该酶的最适pH为9.0。 金黄色葡萄球菌肠毒素：是金黄色葡萄球菌一种重要的致病物质。本菌引起的食物中毒是因为食品污染了金黄葡萄球菌后，由细菌产生大量肠毒素而导致的。 近年报导表明，50%以上的金黄色葡萄球菌菌株在实验室条件下可产生肠毒素，并且1个菌株能产生两种或两种以上的肠毒素。 肠毒素是一种可溶性蛋白质，由单个无分枝的肽链组成。分子量约为3000左右。易溶于水，难溶于有机溶剂。 金黄色葡萄球菌的肠毒素 耐热，经100℃煮沸30min不被破坏，也不受胰蛋白酶的影响。食物中的肠毒素耐热性更强，一般烹调温度不能将其破坏。218~248 ℃的油中需30min才能被破坏。可引起急性胃肠炎。 根据肠毒素的血清型，可分A、B、C（C1、C2）、D、E 5 个型。A型肠毒素引起的食物中毒较多，约占50%左右。其他依次为D、C、B和E型。也有A＋D、A＋B、A＋C、B＋C等。 A型肠毒素毒力较强，摄入1μg即可引起中毒；B型毒力较弱摄入25μg，才引起中毒。一般认为引起人中毒的最小剂量是1.0~7.2μg/kg。 金黄色葡萄球菌的检测程序 检样25g(mL) ＋225mL生理盐水或磷酸盐缓冲液 7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤 36±1℃ Baird-Parker平板，血平板 涂片染色 观察溶血 血浆凝固酶试验 报告 血平板18~24h， Baird-Parker平板18~24h或45~48h。 BHI肉汤和营养琼脂小斜面 36±1℃ 18~24h 增菌培养基 7.5%氯化钠肉汤：为葡萄球菌选择性增菌培养基，因金黄色葡萄球有耐受高盐的特性，因而能在此增菌液中生长，除某些嗜高盐的海洋菌外，大多数细菌都被增菌液中的高盐所抑制。 胰酪胨大豆肉汤：含氯化钠达10%，以胰酪胨替代牛肉浸粉，并加入少量磷酸氢二钾和葡萄糖促进葡萄球菌的生长。 样品的稀释 固体和半固体样品：称取25g样品至盛有225 mL磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000 r/min均质1min～2min，或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。 液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品至盛有225mL磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。 增菌与分离培养 增菌培养：吸取5mL上述样品匀液，接种于50mL 7.5%氯化钠肉汤或10%胰酪胨大豆肉汤培养基内，36℃±1℃培养18h～24h。金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在10%胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长。 将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker平板和血平板，血平板36℃±1℃培养18h～24h。Baird-Parker平板36℃±1℃培养18h～24h或45h～48h。 分离培养基 Baird-Parker琼脂：培养基中含有卵黄亚碲酸钾，能抑制大多数细菌的繁殖，并能促进金黄色葡萄球菌的