课件：胶质瘤患者CSF中分子标记物检测方法与意义.ppt

* * * * 胶质瘤患者CSF中分子标记物检测方法与意义 首都医科大学附属北京天坛医院 蒋海辉 分子标记物获取途径 肿瘤标本： 1、最珍贵，最可靠的临床样本； 2、获取难度大，需手术获得； 血清标本： 1、标本易获得； 2、检测阳性率较低，因血脑屏障的存在很大大分子物质在外周血液难以检出； 3、血清杂质多，其他血液细胞存在干扰； 分子标记物获取途径 脑脊液标本： 1、容易获得，通过腰穿即可； 2、颅内肿瘤细胞分泌的物质存在于CSF中； 3、CSF中无杂质（cell-free），杂质蛋白含量仅为0.2-0.8mg/ml，远远低于血清中蛋白含量，masking effect 极小； 4、脑肿瘤分泌相关蛋白为血液中的1000-1500倍； CSF是最理想的标本 分子标记物临床意义 Diagnostic：分子标记物可为胶质瘤的个体化诊断理论依据，如1p/19q、IDH… Prognostic：分子标记物可以协助判断胶质瘤患者预后，如1p/19q、IDH… Therapeutic：部分分子标记物可以为患者个体化治疗提供理论依据，甚至设计靶向药物，如MGMT、VEGF、EGFR vIII… 实例：micro-RNA 方法：收集胶质瘤患者CSF样本10份（实验组），神经功能紊乱患者CSF样本10份、PCNSL患者CSF样本23份、脑转移瘤患者CSF样本7份（对照组）； micro-RNA检测方法：RNA提取、反转录、qRT-PCR； 实例：micro-RNA 结果：胶质瘤患者CSF样本中miR-15b、miR-21表达量明显低于对照组。 筛选指标：通过检测患者CSF中micro-RNA表达量筛选出胶质瘤特异性指标 实例：micro-RNA 结果：胶质瘤患者CSF中miR-15b、miR-21的相对表达量（Relative expression levels ）均显著低于Control组 反向验证：通过检测CSF中miR-15b、miR-21表达量来诊断胶质瘤 实例：micro-RNA 反向验证：针对miR-15b指标ROC分析 结果： miR-15b指标曲线下面积AUC=0.96； miR-15b指标REL=0.4作为cut-off值，其敏感性为90%，特异性为94.9% 联合miR-15b、miR-21两指标，诊断准确性更优 实例：micro-RNA 文章NEW FINDINGS： miR-15b富含于胶质瘤患者CSF中，是神经功能紊乱患者组的25倍，PCNSL组的5倍，转移瘤组的17倍，为此，它可作为可靠的胶质瘤诊断指标； miR-15b通过调节细胞周期，参与胶质瘤的发生过程。它可能是一个抑癌基因，在细胞周期G1期作用于Cyclin E1(CCNE1)； miR-21同样高表达于胶质瘤患者CSF中，它是一个肿瘤基因，可以抑制肿瘤细胞凋亡；它可以靶向作用于一些抑癌基因，如PTEN、PDCD4等；它可以直接下调TIMP3，增加肿瘤细胞侵袭性； 实例：Proteins 方法：从PubMed MEDLINE上文献检索相关研究蛋白； 标本：收集29例胶质瘤患者23份CSF样本，3份肿瘤囊液； Proteins检测方法：ELISA； 实例：Proteins 研究相关实用网址： 寻找基因相关信息：NCBI GENE databases (http://www.ncbi. /gene/)； 基因相关蛋白表达谱查询：Human Protein Atlas (HPA: / )； 查询蛋白间相互作用：Protein Analysis Through Evolutionary Relationships (PANTHER) website ()； 蛋白作用信号通路：Ingenuity Pathway Analysis (IPA: Ingenuity Systems, Mountain View, CA, USA, http:// )； 实例：Proteins 14.7% were signaling molecule, 8.8% were cell adhesion molecule, and 8.8% were lyase)； 实例：Proteins 40.7% binding, 25.9% catalytic activity, and 14.8% structural molecule activity), and 7 molecular function groups； 实例：Proteins 16.7 % cellular process, 14.8 % developmental process, and 14.8 % metabo