课件：金黄色葡萄球菌检验PPT.ppt

* * 金黄色葡萄球菌定性检验 1. 了解金黄色葡萄球菌生物学特性。 2. 掌握金黄色葡萄球菌定性检测程序和检验方法。 学习目的与要求 一、生物学特性——菌体形态及培养特征 革兰氏阳性球菌，直径为0.5-1.0微米，镜检时呈单个、成对、四联或不规则的簇群，如葡萄状，故称为葡萄球菌。 大多数菌株产生类胡萝卜素，使细胞团呈现出深橙色到浅黄色，色素的产生取决于生长的条件，故称金黄色葡萄球菌(高盐甘露醇平板：金黄色葡萄球菌为淡黄色菌落；其他葡萄球菌为白色菌落)。 最适生长温度37℃，最适pH为7.4； 兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好； 可在高盐环境下生长，15%氯化钠环境下还能生长； 一般用含10%氯化钠的胰酪胨大豆肉汤增菌或7.5%氯化钠肉汤增菌。 所有的毒株产生血浆凝固酶，人和动物来源的菌株通常可凝固兔、人、马和猪的血浆。 金黄色葡萄球菌产生磷脂酶、蛋白酶、脂肪酶和溶菌酶等，大多数菌株可水解天然的动物蛋白并释放脂肪酸。在BP平板产生磷脂环。 生物学特性 ——致 病 性 金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶： a.溶血素：外毒素，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死；在血平板培养出现溶血环。 b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。 d.耐热核酸酶　　 e.肠毒素：引起急性胃肠炎。 葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的疾病，可引发不同程度的急性胃肠炎症状，恶心、呕吐最为突出而且普遍，腹痛、腹泻次之。 当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经8-10小时即可相当数量的肠毒素。 二、检验程序与操作方法 食品安全国家标准GB 4789.10-2016 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验 第一法 金黄色葡萄球菌定性检验 检样 25g(ml)样品+225ml7.5%氯化钠肉汤，均质 Baird-parker平板，血平板 BHI肉汤和营养琼脂小斜面 涂片染色 观察溶血 血浆凝固酶试验 报 告 36± 1℃ 36± 1℃ 18h- 24h BP平板 24h-48h 血平板 18h-24h 36± 1℃ 18h- 24h 检样 25g(ml)样品+225ml7.5%氯化钠肉汤，均质 Baird-parker平板，血平板 BHI肉汤和营养琼脂小斜面 涂片染色 观察溶血 血浆凝固酶试验 报 告 36± 1℃ 36± 1℃ 18h- 24h BP平板 24h-48h 血平板 18h-24h 36± 1℃ 18h- 24h 检样 25g(ml)样品+225ml7.5%氯化钠肉汤，均质 Baird-parker平板，血平板 BHI肉汤和营养琼脂小斜面 涂片染色 观察溶血 血浆凝固酶试验 报 告 36± 1℃ 36± 1℃ 18h- 24h BP平板 24h-48h 血平板 18h-24h 36± 1℃ 18h- 24h 检样 25g(ml)样品+225ml7.5%氯化钠肉汤，均质 Baird-parker平板，血平板 BHI肉汤和营养琼脂小斜面 涂片染色 观察溶血 血浆凝固酶试验 报 告 36± 1℃ 36± 1℃ 18h- 24h BP平板 24h-48h 血平板 18h-24h 36± 1℃ 18h- 24h 检样 25g(ml)样品+225ml7.5%氯化钠肉汤，均质 检验程序 ——样品处理 称取25g（mL）样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤的无菌均质杯内,8000r/min~10000r/min均质1min~2min,或放入盛有225mL7.5%氯化钠肉汤无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1 min~2min。 检验程序 ——增菌 利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（最高可耐受15%的氯化钠），用7.5%氯化钠肉汤增菌。 36±1℃培养18h~24h。 检验程序 ——分离培养（血平板和BP平板） 血平板：金黄色葡萄球菌可以产生溶血素，因此在血平板上产生明显的溶血环。 典型菌落：呈金黄色，有时也为白色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，菌落周围有完全透明溶血环。 大而突起，圆形，不透明，表面光滑，有溶血环 阳性 阴性 BP（贝尔德- 帕克）平板： 胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素和矿物元素 丙酮酸钠是一种生长促进剂 亚碲酸盐对除金黄色葡萄球菌外的其他能分解卵黄的菌株有毒性，并使菌落产生黑色 卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环 甘氨酸和氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的其它菌