课件：区分沙门氏菌及金黄色葡萄球菌.ppt

区分沙门氏菌和金黄色葡萄球菌 范聪聪 目的： 用革兰氏染色法区分金黄色葡萄球和沙门氏菌 原理：  通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。 药品： 金黄色葡萄球菌，沙门氏菌； 草酸铵结晶紫，番红水溶液，碘液，95%乙醇， 仪器： 载玻片，接种环，酒精灯，打火机，吸水纸，显微镜，香柏油，擦镜纸，废水缸 操作步骤： 1）涂片：取灭过菌的载玻片于实验台上，把沙门氏菌和金黄色葡萄球菌分别涂在两个载玻片的中央，用烧红冷却后的接种环将液滴涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜过大 2）干燥：将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形 3） 固定：固定常常利用高温，手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-3次，共约2-3秒种，并不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉过烫为宜（不超过60℃），放置待冷后，进行染色。 4） 初染：在涂片薄膜上滴加草酸铵结晶紫1-2滴，使染色液覆盖涂片，流水冲洗 媒染：将碘液滴在涂片薄膜上，使染色液覆盖涂片，流水冲洗 吸 脱色：斜置载玻片，滴加95%乙醇脱色，至流出的乙醇不现紫色为止，大约需时20-30S，随即水洗 复染：在涂片薄膜上滴加沙黄染液1-2滴，使染色液覆盖涂片，染色约1min。 水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止 5）干燥、观察：用吸水纸吸掉水滴，待标本片干后置显微镜下，用低倍镜观察，发现目的物后滴一滴浸油在玻片上，用油镜观察沙门氏菌和金黄色葡萄球的形态及颜色。 结果： 金黄色葡萄球菌被染成紫色为革兰阳性菌， 沙门氏菌被染成红色为革兰阴性菌 注意事项： 1·选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。 2.涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。 3.脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，脱色过度造成假阴 后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！ 致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求 * * * * * * * *