课件：实验三 食品中金黄色葡萄球菌的检验.ppt

* * * * 实验三 食品中金黄色葡萄球菌的检测 检测方法： 1、参照GB 4789.10-2010金黄色葡萄球菌检测 2、《食品微生物学实验原理与技术》实验三十 食品中金黄色葡萄球菌检测 实验目的： 1、了解金黄色葡萄球菌检验原理； 2、掌握金黄色葡萄球菌鉴定要点和检验方法 金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属的一个种，可引起皮肤组织炎症，还能产生肠毒素，如果在食品中大量生长繁殖并产生毒素，可引起食物中毒，故食品中存在金黄色葡萄球菌对人的健康是一种潜在的危险，检查食品中金黄色葡萄球菌及数量具有实际意义。 金黄色葡萄球菌性质及培养特征 1、革兰氏阳性球菌，排列为葡萄状，无芽孢、无荚膜。 金黄色葡萄球菌的扫描电镜照片 经18～24小时培养后形成圆形隆起、边缘整齐、表面光滑、湿润、不透明的菌落，直径为1～2mm，不同菌株可产生不同色素，出现金黄色、白色、柠檬色。 大肠杆菌在普通营养琼脂上的菌落特征：中等大小、圆形、表面光滑、无色半透明、边缘整齐 2、在普通营养琼脂平板上的菌落特征： ?????????????????????????????????????????????????????????????????? 金黄色葡萄球菌在普通营养琼脂平板上的菌落 3、具有高耐盐性，在7.5%氯化钠肉汤中呈现浑浊生长； 4、在BP平板上菌落特征：圆形、光滑凸起，湿润，直径为2～3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围有一浑浊带，外层有一透明圈； 5、在血平板上菌落特征：呈金黄色，有时也呈白色，大而凸起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈； BP培养基上的菌落 血平板上的菌落 6、血浆凝固酶试验 致病性菌株可以产生血浆凝固酶，使血浆发生凝固。 原理： 鉴定食品中金黄色葡萄球菌：根据以上性质逐步确定。 鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标：金黄色葡萄球菌能产生凝血浆酶，使血浆凝固；多数金黄色葡萄球菌致病菌株能产生溶血毒素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，在试管中出现溶血反应。 实验材料： 1、样品：（1）含有大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的水样 （2）鲜奶 2、培养基与试剂：7.5%氯化钠肉汤、血琼脂平板、Baird-Parker氏培养基、无菌水、革兰氏染色剂 3、器具及其他用品：显微镜、恒温培养箱、无菌吸管、无菌试管、无菌平皿、载玻片、涂布器、酒精灯、接种环等 流 程 1、增菌培养法 1.1检样处理：无菌操作取样25g（mL）加入225mL灭菌生理盐水，固体样品研磨或均质制成混悬液。 1.2增菌及分离培养：吸取5mL上述混悬液，接种于7.5%氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤50mL培养基内，36℃±1℃培养24h，转种血平板和BP平板， 36℃±1℃培养24h，挑取血平板上金黄色（有时为白色）菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶实验。 1.3兔血浆凝固酶试验： 吸取1：4新鲜兔血浆0.5mL，放入小试管中，再加入培养24h的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤培养物0.5mL，振荡摇匀，置36℃±1℃温箱或水浴内，每半小时观察一次，观察6h，如呈现凝固，即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块者，被认为阳性结果，同时与已知阳性和阴性葡萄球菌菌株及肉汤作为对照。 2、直接计数方法 2.1 梯度稀释转种BP平板 吸取上述1：10混悬液，进行10倍第次稀释，根据样品污染情况，选择不同浓度的稀释液1mL，分别加入三块BP平板，每个平板接种量分别为0.3mL、0.3mL、0.4mL，然后用灭菌涂布器涂布整个平板，如水分多不易吸收，可将平板放在36℃±1℃1h，等水分蒸发后反转平皿置36℃±1℃培养。 2.2转种血平板 在三个平板上寻找周围有浑浊带的黑色菌落，并从中任选五个菌落，分别接种血平板， 于36℃±1℃培养24h后进行染色镜检、血浆凝固酶试验，步骤同增菌培养方法。 2.3 菌落计数 将三个平板中疑似金黄色葡萄球菌黑色菌落数相加，乘以血浆凝固酶阳性数，除以5，再乘以稀释倍数，即可求出每克样品中金黄色葡萄球菌数。 结果 1.根据形态特征、血平板情况以及血浆凝固酶试验，判别检样中是否含有金黄色葡萄球菌。 2.估算检样中金黄色葡萄球菌的含量。 GB 4789.10-2010 第一法 金黄色葡萄球菌定性检验 GB 4789.10-2010 第二法 金黄色葡萄球菌 Baird-Parker平板计数 GB 4789.10-2010 第三法 金黄色葡萄球菌MPN计数 三法特点及适用性： 第一法适用于食品中金黄色葡萄球菌的定性检验 第二法适用于金黄色葡萄球菌含量较高的 食品中金黄色葡萄