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石斛属种质资源遗传多样性的SRAP与SSR分析研究进展 姓名：廖洪玉 学号：2010071136 专业：生物教育 指导老师：陈美霞（讲师） 论文框架 石斛简介 遗传多样性 分子标记 今后研究方向 1 2 3 4 一、石斛 简介 石斛属为兰科的第二大属，多年生草本植物。石斛属具有开发价值和经济价值包括药用价值、观赏价值。我国分布有76种2变种，以云南、贵州、广西等地为主要分布地，大多分布在450~900 m的温凉高湿地带，受小环境内的相对湿度、温度、光照等气候因子影响较大，与伴生植物混生的条件下生长发育最好。石斛属植物作为一类珍贵的中药材和外贸出口药材具有较高的药用价值，同时作为中国和世界各地著名的花卉又有着较高的观赏价值。 石斛的药用功能：滋阴清热，生津益胃，润肺止咳，明目强身，抗衰老、抗肿瘤、抵抗机体免疫力、扩张血管及抗血小板凝集作用。石斛还可以作为很好的保健品。 二、遗传多样性 遗传多样性（genetic diversity）是生物界所有遗传变异的总和，遗传多样性的来源主要包括染色体变异、分子的变异，是生物多样性的基础和最重要的组成部分。 遗传多样性是生物遗传改良的源泉，是生物多样性的重要组成部分，是物种或种群进化潜力和适应环境能力的基础，是物种能否可持续利用的重要基础。 三、分子标记 定义：分子生物学技术的发展为植物育种提供了一种基于DNA变异的新型遗传标记—DNA分子标记，或简称分子标记。分子标记是随着分子生物学的快速发展而产生的一种通过检测DNA碱基序列变异来鉴别研究材料的新型遗传标记。 1.SRAP分子标记及在石斛中应用 2.SSR分子标记及在石斛中应用 SRAP分子标记简介 SRAP（相关序列扩增多态性，）是一种新型的基于PCR的标记系统，由美国加洲大学蔬菜系Li与Quiros博士于2001年在芸薹属植物开发出来，又叫基于序列扩增多态性，引物设计是它的核心，SRAP－PCR反应体系中使用两个引物：即17个碱基的正向引物和18个碱基的反向引物。在一组正向SRAP引物中使用“CCGG”序列，其目的是使之特异结合可译框（ORFs）区域中的外显子；反向引物的3’端含有核心序列“AATT”，以特异结合富含AT区序列中的启动子和内含子， 因内含子、启动子和间隔序列在不同物种甚至不同个体间变异很大，从而与正向引物搭配扩增出基于内含子和外显子的SRAP多态性标记 SRAP标记在石斛中应用 樊洪泓等人首次将SRAP标记技术应用于石斛遗传多样性研究中，对包括铁皮石斛3个居群的9种供试石斛进行研究，发现霍山石斛在分类地位上更接近于铜皮石斛，与铁皮石斛的亲缘关系相对较远。浙江、云南和霍山3个居群的铁皮石斛中，浙江居群与云南居群的亲缘关系更近。结果表明SRAP标记技术完全可以应用于药用石斛的遗传多样性及亲缘关系的研究。 随后该作者还将SRAP技术与RAPD技术在石斛属几种植物中的应用进行了比较分析，采用40对SRAP引物组合和36个RAPD引物分别对供试的9份石斛种质进行遗传多样性研究，SRAP引物组合共扩增条带1977条，多态性比率为90.2%，遗传相似系数GS值变化范围为0.3302—0.7892。RAPD引物共扩增出281条带，多态性比率为87.1%，GS值变化范围为0.4942—0.7731。两种标记得到的聚类结果存在一定的差异，SRAP聚类结果与传统的基于形态特征建立的分类结果比较一致，较好地体现了供试品种的亲缘关系、地域特性。SRAP标记在石斛的遗传多样性与亲缘关系的研究中表现出了极大的优越性。 任羽等人利用SRAP技术对海南9种石斛种质资源的遗传多样性进行分析。从30对SRAP引物中筛选获得18对多态性引物，SRAP-PCR扩增共获得285条多态性条带，平均每个引物产生15.8个多态性条带，种间遗传相似系数变化范围为0.179-0.636，说明海南省内分布的石斛具有丰富的遗传多样性。聚类分析可以将参试品种分为4类。 Ding等人利用SRAP标记以铁皮石斛的9个野生种的84个植株作为研究材料，结果发现在物种水平上遗传多样性较高，居群水平上差异性较低。利用2种聚类软件进行分析结果都一致，可以将供试材料明显的分为2大类。以上研究结果均表明SRAP技术可以很好地从分子水平上揭示石斛种质资源的遗传背景及亲缘关系。 SSR分子标记简介 简单重复序列 (single sequence repeat）简称SSR s)或微卫星(m icrosatellite)序列，是一类由几个核苷酸（1-6个）为重复单位组成的长达几十个核苷酸串联重复序列。在植物中，它广泛分布于整个真核生物基因组的不同座位上，这些串联重复序列由于基元的重复次数不同而形成的多态性称为简单序列长度多态性（Simple Sequen