课件：骨髓活检、免疫组化的具体运用及病例分享.ppt

* * 第三次骨髓涂片（3.30） 骨髓提示大量吞噬组织细胞，三系增生活跃，形态大致正常。 骨髓活检（3.24） 提示异常细胞散在及小簇浸润，胞体偏大，形态不规则，胞浆量丰富，核不规则，核染色质较粗，部分可见核仁。阅片可见吞噬组织细胞。 免疫组化 CD3：散在+，CD5：散在+，CD20：散在+，PAX5：散在+，CD2：+++，CD56：++，TIA1：+++。 结合HE切片，本例提示为NK细胞淋巴瘤侵犯骨髓可能性大。 第二次骨髓活检（3.30） 提示三系增生活跃，易见吞噬组织细胞，未见异形细胞。 流式细胞，染色体及分子生物学均未见异常 EB病毒DNA定量：1.36 ×104/ml。 结论：考虑侵袭性NK淋巴瘤？ 病例四 女，52岁，上腹部疼痛7天，伴鼻出血1次 患者因恶心呕吐，为胃内容物，次数频繁，排便排气，2天前出现鼻出血1次，鲜红色，量约20ml。 体格检查：神志清，精神萎，发育正常，营养中等，查体合作，中度贫血貌，全身皮肤粘膜无黄染，无肝掌及蜘蛛痣，双侧颈部可触及肿大淋巴结，约1×1cm，质中，有触痛，余浅表淋巴结未及肿大。右侧季肋部疼痛。肝脾未及。 实验室检查 血常规示：WBC2.75×109/L ；RBC2.04×1012/L ；HB63g/L ；血小板计数 35×109/L。 生化检查：肌酐?336.7?umol/L↑，尿酸?1122?umol/↑L，乳酸脱氢酶?597?U/L↑，总蛋白?56.90?g/L↓，白蛋白?34.10?g/L↓；血清免疫固定电泳：轻链L型；24h尿轻链总量：L轻链 7.144g 腹部B超：脂肪肝，右肾结石，左肾囊肿，胆胰脾输尿管未见明显异常； 胸腹部CT：双侧胸膜多发淋巴结影，伴两侧胸腔积液，双侧肾上腺多发结节影，考虑转移瘤可能，支气管炎，两下肺慢性炎症，双侧肾盂结石； 免疫球蛋白：免疫球蛋白M? 0.17?g/L↓,免疫球蛋A ?0.25?g/L↓,免疫球蛋白G?5.13?g/L↓；铁蛋白?796.50?ng/mL↑； 骨髓涂片 骨髓增生活跃 阅片可见 异常细胞 10×10 100×10 100×10 100×10 100×10 异常细胞：该细胞胞体偏大，胞浆量丰富，呈蓝色，有泡沫感；胞核大，大多不规则，异型性明显，可见多核。 初步考虑那些疾病？ 1.淋巴瘤骨髓浸润？ 2.骨髓转移性肿瘤？ 3.急性白血病？ 4.多发性骨髓瘤？ 5.其他疾病？ 骨髓病理 提示，结节样增生的幼稚细胞，细胞胞体偏大，胞浆量丰富；胞核大，大多不规则，异型性明显，约占有核细胞80%。 免疫组化结果 组化：CD38：++，CD138：++，CD56：-，κ：-，λ：+，MUM1：+++，CD34：血管内皮+。 结合HE切片，本例考虑为多发性骨髓瘤。 流式细胞 异常浆细胞占33%（CD138+CD38+CD19-CD56-） 染色体核型分析 79,XX,-1,-1,-3,-4,-4,-5,+8,-9,-10,-13,-16,-16,-16,-16,+18,-21,-22,+mar1,+mar2[cp3]/46,XX[7] 分子生物学检查 该检测标本IGK重排检测阳性 多发性骨髓瘤λ型DS分期III期B组ISS分期Ⅲ期 结果 70例MM患者不同检测方法肿瘤负荷的比较 方法 骨髓涂片 流式细胞 骨髓活检 MM细胞比例 26.29%±22.01% 7.20%± 10.92% 59.50%±29.70% MM患者骨髓瘤细胞呈局灶性分布、骨髓粘滞度高以及骨髓穿刺抽取骨髓量较多导致标本稀释所致，因此判定肿瘤负荷以骨髓活检最为准确。初诊MM，联合骨髓活检病理、骨髓穿刺及涂片流式细胞仪检测检测是目前MM骨髓诊断的“金标准”。 免疫组化 是免疫学与组织化学相结合的一个分支。 以特异性抗体（一抗）与组织中相应抗原反应后，加入酶标记的第二抗体，二抗与抗原-抗体复合物的一抗结合，形成抗原-抗体-酶复合物，用所标记酶的底物与酶反应生成有色产物，产物生成部位即为抗原存在部位。 免疫组化的优点 对异常细胞进行定位及定性 对疾病急性诊断及鉴别诊断 回顾性诊断及分析 免疫组化的应用 淋巴瘤的诊断，分型及鉴别诊断 髓系肿瘤由于细胞分化阶段不如淋系明显，所以髓系肿瘤主要依靠骨髓象及遗传学，仅作辅助诊断。 结果的判定 总结 临床 明确诊断 淋巴增强因子-1（LEF1） LEF1是LEF1/TCF 转录因子家族的成员之一 LEF1是经典的Wnt 信号通 路下游的关键核内转录因子 LEF1调节一系列与 细胞周期和增殖相关的基因 LEF1 LEF1在结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌等多种实体肿瘤均呈高表达 LEF1在机体造血细胞，尤其是前B细胞和T淋巴细胞的