课件：病理学-肿瘤.ppt

1998年,Andrew Fire等首次提出了RNA interference A control: not stained B: wt C: wt + antisense RNA D: wt + ds RNA Mex-3 mRNA detection in embryos by in situ hybridization Double-stranded RNA inject C. elegans sense antisense RNAi机制 Dicer RISC 碱基互补 酶解 short-interfering RNA 34 27 21 20 16 Tuschl, 2001  siRNAs long dsRNA short-interfering RNA （21-23nt） 起始阶段: 加工长链 dsRNA形成 21-23 nt 小片段 RISC: RNA-Induced Silencing Complex Exonuclease Homology search activity Endonuclease Helicase 5’ 3’ Target mRNA OH3’ 5’P 效应阶段：形成RISC复合物，降解目的mRNA RNA干扰首次揭示了一种由RNA介导的全新的基因表达调控机制。 自1998年发现以来，RNA干扰已经作为一种强大的“基因沉默”技术而出现。 这项技术被用于全球的实验室来确定各种病症中哪种基因起到了重要作用。 RNAi 的应用： 功能基因组学 抗肿瘤 抗病毒 基因治疗的新策略 端粒与端粒酶(telomere and telomerase) 3? 5? 3? 5? 解链方向 3′ 5′ 3′ 3′ 5′ 领头链 (leading strand) 随从链 (lagging strand) 端粒： 染色体末端的DNA重复序列以及同这些序列特异性结合的蛋白质构成的特殊结构。 端粒在染色体末端形成帽子结构 人类和哺乳动物:TTAGGG 四膜虫:GGGGTT或GGGGTTTT 染色体断口具有“黏性”，各断口之间很容易彼此重新连接而造成染色体易位、倒位、缺失、双着丝粒等类型的畸变，即具有断裂末端的染色体具有不稳定性 t-loop 紧凑结构 维持染色体的稳定性 功能： 遗传信息的完整性 端粒随细胞复制次数增加而逐渐缩短，细胞每复制一定，端粒缩短50-200bp 当缩短到一定程度时，失去对染色体的保护作用，细胞死亡或进入衰老（细胞生命的计时器）。 端粒酶： 修复端粒的一种酶，使缩短的端粒长度恢复，从而 保持细胞强大的自我复制能力。 端粒酶RNA（hTR，富含C、 A） 蛋白质（端粒酶相关蛋白1，hTP1)) 端粒酶逆转录酶(hTRT) 端粒酶结合在端粒的特异位点，以其自身RNA为模板发挥逆转录酶作用，合成端粒DNA 恶性肿瘤细胞有较高的端粒酶活性，细胞永生化。 端粒酶与肿瘤 许多肿瘤在原位癌期即可测得端粒酶活性增高， 如乳腺癌、肺癌的极早期即可测出端粒酶活性呈 强阳性 端粒酶可预测各种肿瘤的预后情况。 90% 的恶性肿瘤组织中都存在端粒酶活性呈强阳性, 胃癌 85%、肝癌 85%、乳腺癌85%、肾癌 71%、胰腺癌 95% 等。 肿瘤发生的分子机制 肿瘤发生是一个多步骤的过程，涉及多个基因的改变。 经典实验：结、直肠癌的多步骤发生模式： 原癌基因激活 抑癌基因失活 调亡调节基因 DNA修复基因 细胞克隆性增生 肿瘤 致癌因素 基因损伤 单克隆性增殖 演进和异质化 不同生物学 亚克隆 浸润转移 进一步 基因损伤 综上 其它突变 常染色体显性遗传疾病： 视网膜母细胞瘤：RB基因 多发性大肠腺瘤性息肉病：APC基因 遗传因素 常染色体隐性遗传疾病： 着色性干皮病：DNA修复基因 缺陷， 导致 皮肤癌、黑色素瘤 Bloom综合症：易患恶性肿瘤，白血病 免疫因素 （1）正常机体有免疫监视，先天性免疫缺陷或 接受免疫抑制治疗的患者，肿瘤发生高。 （2）肿瘤抗原：肿瘤特异性抗原 肿瘤相关抗原 （3）抗肿瘤免疫反应 肿瘤特异性抗原 肿瘤细胞独有的抗原，不存在于正常细胞。与MHC结合形成免疫复合物会被机体免疫细胞识别。 肿瘤相关抗原 即存在于肿瘤细胞，也存在于正常细胞。 胚胎抗原：在胚胎组织中表达量， 在分化成熟的组织中不表达或表达很少， 在癌变组织中表达增加。 （AFP、CEA） 肿瘤相关抗原 分化抗原： 正常细胞与肿瘤细胞都有的， 与某个方向的分化有关的抗原。 （PSA、酪胺酸酶 ) 肿瘤相关抗原