课件：血清蛋白电泳.ppt

电泳技术应用广泛，在临床生化实验技术中占有重要地位，主要用于蛋白质的分离、鉴定和定量。目前已经发展到自动化的电泳系统，整个电泳过程包括点样、脱色、扫描定理都实验现了自动化操作。同时用半干胶技术取代液体缓冲液，使得电泳操作更规范、简便，电泳结果重现性更好。 左边接负极，右边接正极。在pH8.6的巴比妥缓冲液中，蛋白质带负电荷，向正极移动。清蛋白染色最深，泳动的距离最长，?-球蛋白的带最宽，泳动的距离最短。 浆细胞病（plasma cell dyscrasia）时，异常浆细胞克隆增殖，产生大量单克隆免疫球蛋白或其轻链或重链片段，病人血清或尿液中可出现结构单一的M蛋白（monoclonal protein）。 2011春季学期 电泳分析血清蛋白电泳血清免疫固定电泳 何肖娟 hxj50701@163.com 南方医科大学 生物化学与分子生物学实验教学中心 2011春季学期 19/4 电泳技术 电泳：溶液中带电粒子在电场中定向移动的现象称为电泳（electrophoresis）。 电泳技术是利用带电粒子在电场作用下定向移动的特性，对混合物组分进行分离、纯化和测定的一项技术。 2011春季学期 19/4 电泳的分类 按分离目的：分析电泳和制备电泳 按电场强度：常压电泳和高压电泳 按电泳媒介：自由电泳和区带电泳 区带电泳（按支持介质）：淀粉凝胶电泳 滤纸电泳 醋酸纤维素薄膜电泳 琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳 按支持介质形式：水平式电泳、垂直电泳 按缓冲液pH值：连续pH和不连续pH电泳 2011春季学期 19/4 临床电泳项目 临床上以琼脂糖电泳法开展的电泳项目： 血清蛋白电泳 免疫固定电泳 尿蛋白电泳 同工酶电泳 脑脊液寡克隆电泳 本周氏蛋白电泳 脂蛋白电泳 2011春季学期 19/4 血清蛋白电泳（SPE） 检测蛋白质水平病理改变的方法和手段。 主要用于肝病、肾病、自身免疫病、血液病、多发性骨髓瘤等蛋白质紊乱疾病的诊断。 电泳图谱不能直接对临床疾病进行确诊，但可通过特征性图谱对某些疾病进行分类，评估疾病的进程和活动状况，评价治疗方案是否有效。 2011春季学期 19/4 血清免疫固定电泳（IFE） 是一种包括琼脂糖凝胶蛋白电泳和免疫沉淀两个过程的操作，是免疫沉淀反应的一种混合技术。 优势：将血清蛋白电泳、高分辩率、抗原-抗体特异性免疫反应等有机结合，对蛋白进行分离和定型，形象地观察Ig的各类重链和轻链分型。 2011春季学期 19/4 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳结果 2011春季学期 19/4 血清蛋白质的等电点、平均相对分子量、及正常含量 清蛋白 A α1 α2 β γ pI 相对分子量 （×104） 含量（%） 4.88 6.9 57~72 5.06 20 2~5 5.06 30 4~9 5.12 9~15 6.2~12 6.85~7.3 15.6~30 12~20 球蛋白 2011春季学期 19/4 正常血清蛋白质电泳图谱 2011春季学期 19/4 血清蛋白电泳区带 白蛋白区带：主要由白蛋白构成。 α1-球蛋白区带： α1-抗胰蛋白酶、 α1-脂蛋白、 α1-酸性糖蛋白、甲状腺结合球蛋白、凝血酶原等。 α2-球蛋白区带： α2-巨球蛋白、结合珠蛋白、铜蓝蛋白、 α2-脂蛋白、红细胞生成素等。 β-球蛋白区带：主要含铁蛋白、β-脂蛋白、补体C3、C4、β2-微球蛋白等。 γ-球蛋白区带含IgG、M、A、D、E免疫球蛋白。 2011春季学期 19/4 正常参考值 A：32～50g/L(60.3～71.4%） α1：10～40g/L（1.4～2.9%） α2：6～10g/L（7.2～11.3%） β：6～13g/L（8.1～12.7%） γ：7～15g/L（8.7～16.0%） 2011春季学期 19/4 2011春季学期 19/4 2011春季学期 19/4 临床意义 1、M蛋白（异常免疫球蛋白）血症： 在β-球蛋白区、γ-球蛋白区或两者之间，出现区带细而浓，有时呈波浪状，在光密度计扫描图上呈尖陡高峰的M蛋白带。 2、蛋白质缺乏症 3、肾病 4、急慢性炎症 5、肝病：肝硬化出现“β-γ桥” 原发性肝癌