课件：金黄色葡萄球菌的检测方法的.ppt

* * * * 金黄色葡萄球菌的检测方法 简介 一·生物学特性 （1）典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH 7.4。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。 （2）血平板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10-15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。 检测方法 1.纸片法 2.免疫学方法 3.分子生物学方法 4.直接平板计数法 一.纸片法 目前广泛应用的一种方法 用纸片、膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显色物质附着在上面，通过观察微生物在测试片上面的生长、显色来测定食品中微生物。 采用快速测试片检测具有显著的优点：a.可测定少量检品，不需要配制试剂，不需要大量的玻璃器皿，操作简便迅速 b.易于消毒保存，便于运输携带方便，价格低廉；c.除纸片外无其他任何废液废物，大大减少了工作量；d.可以在取样时同时接种，结果更能反映当时样本中真实细菌数，防止延长接种时间时细菌繁殖造成的污染。 Title Lorem ipsum dolor sit amet, consectetuer adipiscing elit. Vivamus et magna. Fusce sed sem sed magna suscipit egestas. Lorem ipsum dolor sit amet, consectetuer adipiscing elit. Vivamus et magna. Fusce sed sem sed magna suscipit egestas. 技术优点：操作简单使用方便，避免了繁琐的操作。 技术缺点：用时间比较长，无法准确定性及计数。 此方法现在应用于快速检测领域，美国3M公司Petri film为载体的测试片应用最为广泛。但其也存在一些问题：Petri film测试片上覆盖了一层薄膜，当样品粘液过多时会出现菌落的扩散和融合，影响计数；Petri film测试片面积较小，当菌量大于250cfu时，准确计数较困难；待测样品中含有的某些有机物可能使显色减缓。使目视效果下降，导致计数偏低。 二.免疫学方法 ※ 免疫学方法的基本原理都是抗原抗 体反应。 ※抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。 金黄色葡萄球菌特异的抗原能激发机体产生相应的特异性抗体。 在免疫检测中，可利用单克隆抗体检测金黄色葡萄球菌的特异抗原 也可利用金黄色葡萄球菌抗原检测体内产生的特异抗体，两种方法均能判断机体的感染状况。 （1）抗原抗体技术 （2）免疫学方法技术 免疫学方法包括下面两个部分 （1）抗原抗体技术分析： 抗原抗体技术是免疫技术中的核心部 分，对于金黄色葡萄球菌检测全菌免 疫筛选抗体是很困难的事情，现在目 前市场有的大多都是对金黄色葡萄球 菌毒素类进行免疫得到的抗体 （2）免疫学方法技术分析： 上述免疫学技术应用最多的是酶联免疫技术和胶体金侧向层析技术。 酶联免疫技术广泛应用于实验室检测，由于一次可以检测多个样本，此技术多用于体外诊断，目前也广泛用于食品安全。 （酶联免疫吸附剂测定法，简称酶联免疫法，或者ELISA法） 三 分子生物学方法 金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶 分子生物学方法的技术主要分为：聚合酶链式反应PCR技术和实时荧光定量PCR（rtPCR）技术、生物芯片技术、测序技术。 分子生物学检测技术由于检测方法复杂，需要仪器设备及专业人员操作，对实验室环境有要求，检测成本高等因素，目前该技术没有广泛应用。 通过不断的研究和总结金黄色葡萄球菌快速增殖的环境和条件，在增菌液中进行扩增，使菌数达到胶体金的检测下限，用胶体金方法检测，操作简单，不用任何实验室仪器设备，检测试剂盒价格低廉，比较适合金黄色葡萄球菌检测初筛。 检测方法：将待检测食品取10g食物样品在10%NaCl溶液中涮洗5次，加入增菌液增菌（配合37℃手持小仪器使用可缩短增菌时间），加入菌裂解液摇匀，取3滴点板。结果判断如下图示： 后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等