色谱柱分类与选择-内部培训资料.pptx

一、色谱起源;2;1 Basic principle of chromatographic separation 1.1 色谱分离基本原理;硅胶颗粒基质合成步骤： 1.合成硅胶基质 2.键合配体(键合相) 3.端基封尾 end-capped ;以传统方式制造硅胶色谱填料的过程: 起始原料为矿物硅酸盐（如泡花碱），即A类硅胶;填料的端基封尾 –封口残余硅羟基 –减少不可逆吸附或拖尾 –增加碳含量（0.1% -1%）;单、双、三官能团键合;键合;常用封尾end-capped ：三甲基硅氧烷;封尾;空间位阻：异丙基硅氧烷，异丁基硅氧烷;空间位阻;极性嵌入 polar embedded ;问题：下列色谱柱如何选择？;以传统方式制造硅胶（A类硅胶）色谱填料的过程: 起始原料为矿物硅酸盐（如泡花碱）; ;既然pH 3时硅醇基离解受抑制，为何不在所有情况下采用酸性条件进行分离?;硅胶晶格中杂质铝对硅醇基酸度的影响;硅胶中金属杂质含量对螯合性化合物Hinokitiol峰形的影响; ;传统型C18硅胶柱上金属杂质对碱性化合物峰形的影响;如何解决碱性化合物和螯合物的峰形问题?;现代色谱柱三大技术平台;;常见品牌C18柱在pH7下的性能比较;;对碱性化合物的峰对称性;具有极性嵌入基团的反相填料结构示意;内嵌极性基团固定相：水表面层可能机理;;;分;停流速后 (孔去湿: ~3%);Ecosil C18-EPS Tf USP = 1.1;注: 使用相同的流动相;极性基团嵌入技术（屏蔽技术）的历史沿革;多种品牌色谱柱对碱性化合物的峰形比较;Atlantis? dC18 Column:揭开人类酿酒历史之谜 (2004) ;AQ柱的极性保留秘诀;AQ色谱柱的特点;Atlantisa dC18柱对极性化合物的优异保留性能;Atlantis dC18:丙毒(丙烯酰胺)分析;条件 色谱柱： AtlantisTM dC18 4.6 x 150 mm, 5 μm 流动相 A: 0.1% TFA 水溶液 流动相 B: 0.1% TFA 乙腈溶液 流速: 1.4 mL/min 梯度: 时间 梯度组成 (min) %A %B 0.0 100 0 5.0 97 3 6.0 85 15 10.0 80 20 12.0 0 100 25.0 0 100 进样体积: 10.0 μL 温度: 30 oC 检测: UV @ 268 nm 仪器: AllianceTM 2695, 2996 PDA;问题;HILIC;HILIC柱特性;三聚氰胺和三聚氰酸同时检测;突破高纯硅胶柱局限性的必要性;;宽pH值色谱柱的几种类型;;;高pH条件下柱稳定性的强化测试结果柱寿命比超纯硅胶柱提高十倍以上!;pH对填料稳定性的影响;灵敏度与选择性的改变;简化方法开发过程;;高温寿命试验;宽pH值色谱柱的优点;基于杂化颗粒的XTerra RP18柱与普通C18硅胶柱在分离酸性、碱性化合物时的拖尾因子比较;为何杂化颗粒柱可增强在高pH下的柱寿命？;;;Dibucaine (局部麻醉药-碱性化合物);;Altretamine (三嗪类抗癌药物-强碱性化合物);;您在日常HPLC分析工作中所面临的常见问题;我的色谱分离为何重现性不佳?;;;;;; ;;您在日常HPLC分析工作中所面临的常见问题;我的色谱柱寿命为何不长?;您在日常HPLC分析工作中所面临的常见问题;;如何在实践中调控 ‘a’?这是方法开发的根本!;溶剂选择性;反相色谱中选择性的调节工具;色谱柱选择;反相色谱中选择性的调节工具;选择性与pH;pH带来的保留与选择性变化;方法开发的基本思路 ;运行低pH快梯度：在选择性不同的所有色谱柱上;频繁切换分析柱、流动相溶剂和缓冲液过于繁琐？自动方法开发系统（AMDS system）可帮您解决问题… ;探索性HPLC方法开发;色谱条件;例: 利尿剂;梯度分离测试混合物：利尿剂;利尿剂: 使用乙腈的起始梯度分离;;两种条件下的分离结果考察;;甲醇体系：最终梯度优化结果;利尿剂分离;pH 9.0条件下的溶剂选择性：等度分离条件探索;利尿剂：pH 9条件下最终的等度分离条件;等度分离利尿剂;重要的方法开发为何要从新色谱柱开始？ ;反相色谱柱的选择小结:(1);需要使用宽pH值或高温条件 －如生物碱分离 宽pH值色谱柱：pH1-12 优点：pH范围宽，高温条件下填料稳定性好，色谱峰 形好，寿命长 采用质谱检测器:窄内径/小颗粒/短柱;结语