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实验 9 影响酶促反应的因素 ——温度、pH、激活剂及抑制剂 实验目的 1.学习酶的催化作用特点及影响酶活力的主要因素 2.学习测定酶活力的实验方法 实验原理 生物机体广泛存在各种不同功能的酶，催化不同的生物化学反应： 过氧化氢酶能催化过氧化氢分解释放氧气和水;唾液淀粉酶可将淀粉逐步水解成各种糊精、麦芽糖，用碘显色或本尼迪试剂可以检验酶催化的水解反应产物，并比较反应速度，从而衡量酶的比活性。通过试管颜色反应，可以定性研究影响酶活性的因素。 酶催化反应的活力受到温度、酸碱度和离子强度等因素的影响。一般，温度每增高10℃，反应温度增加一倍，但同时，酶作为蛋白质，温度过高会发生变性逐渐失活，反应速度达到最大值时的温度称为某种酶的最适温度。 酶活力与环境酸碱度密切相关，某种酶只在一定pH范围才具有活力，酶活最高时的pH称为该酶的最适pH。 Cl-可以使淀粉酶的活力增加，是其激活剂；而Cu2+ 使淀粉酶的活力下降，是其抑制剂。 实验器材 材料：唾液 试剂：0.1% 蔗糖，0.1%淀粉， 1% 淀粉，0.2 mol/L Na2HPO4, 0.2 mol/L NaH2PO4, 1% NaCl, 1% CuSO4,1% Na2SO4,本尼迪试剂，碘水， 用具：50 mL 烧杯 2 ，试管，玻璃漏斗，刻度移液管（2mL,5 mL) ，1000 uL移液器，37℃恒温水浴，冰浴，电炉，沸水浴， 6孔白瓷板，一次性吸管 实验操作与现象 酶液的收集制备 漱口后，收集唾液 0.5mL,加入30倍去离子水稀释，混合。 配制酶促反应液时，其它组分均用刻度移液管进行；最后添加酶液时，可用移液器；显色反应，可用一次性吸管滴加试剂。 实验操作与现象 酶的专一性 结论：唾液淀粉酶专一性催化淀粉水解。 无酶对照 底物对照 试 管 1# 2# 3# 4# 备 注 0.1% 淀粉(mL) 2 - 2 - 0.1% 蔗糖(mL) - 2 - 2 唾液(mL) - - 0.5 0.5 水（mL) 0.5 0.5 - - 现 象 在白瓷盘中滴加2滴碘液，反应开始时和反应结束后分别取两滴反应液，观察显色反应（37 ℃反应10 分钟）。（此处可初步判断酶活力） 现 象 本尼迪试剂(mL) 0.1 0.1 0.1 0.1 沸水浴（min） 5 5 5 5 现 象 二 温度对酶活力的影响 试 管 1# 2# 3# 4# 5# 备 注 1% 淀粉(mL) 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 温度预处理 （2 min） 37 ℃ 0 ℃ 沸水浴 0 ℃ 沸水浴 唾液(mL) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 反应 5 min 37 ℃ 0 ℃ 沸水浴 冷却 0 ℃ 37 ℃ 沸水浴 37 ℃ 碘液 （滴） 2 2 2 2 2 现 象 结论：本次实验条件下，唾液淀粉酶最适温度为？ 0 ℃ 可逆性抑制酶活性；沸水浴则使酶变性失活。 操作注意：严格控制温度，碘显色反应均在控温处进行。酶活力较大、小的组，可以调节酶用量，或室温代替37 ℃进行。 三 pH对酶活力的影响 试 管 1# 2# 3# 4# 5# 备注 0.2 M Na2HPO4(mL) 0.16 0.56 1.47 2.43 2.84 0.2 M NaH2PO4(mL) 2.84 2.44 1.53 0.57 0.16 反应体系 pH 5.6 6.2 6.8 7.4 8.0 1% 淀粉(mL) 1 1 1 1 1 温度预处理 混匀，37 ℃孵育2 min 唾液(mL) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 反应监控 每 1 min 取一滴，碘显色，至一管颜色变淡时 取出所有试管，各加入2-5 滴碘液。摇匀，观察 现 象 结论：实验测得唾液淀粉酶的最适pH为？ 四 离子对酶活力的影响 试 管 1# 2# 3# 4# 备 注 1% 淀粉 (mL) 1.0 1.0 1.0 1.0 1% NaCl (mL) 1 - - - 1% CuSO4（mL) - 1 - - 1% Na2SO4（mL) - - 1 - 水（mL) - - - 1 摇匀，37 ℃反应2分钟。（据第一次显色情况，调节观测频度） 唾液(mL) 0.5 0.5 0.5 0.5 在白瓷盘中滴加2滴碘液，反应开始后每1-2min各管取